PCR已成為分子生物學(xué)實驗室里的一種常規(guī)技術(shù)，其原理是利用DNA的半保留復(fù)制，在試管中進(jìn)行DNA的人工復(fù)制（如圖）。該技術(shù)可在很短的時間內(nèi)，將DNA擴增幾百萬倍甚至幾十億倍，使實驗所需要的遺傳物質(zhì)可從生物體外獲得。
（1）加熱至94℃可使DNA雙鏈打開，這一步是打開 氫氫鍵，這一過程稱為 變性變性。
（2）當(dāng)溫度降低時，引物與模板的 3′3′端結(jié)合，在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最終合成兩個DNA分子，此過程中原料是 四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸，遵循的原則是 堿基互補配對原則堿基互補配對原則。
（3）PCR技術(shù)的必要條件，除了模板、引物、原料、酶，至少還需要三個條件，即液體環(huán)境、適宜的 溫度溫度和 酸堿度/pH酸堿度/pH，前者由PCR儀自動調(diào)控，后者則靠 緩沖液緩沖液來維持。
（4）在PCR反應(yīng)過程中，DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是 DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】氫；變性；3′；四種脫氧核苷酸；堿基互補配對原則；溫度；酸堿度/pH；緩沖液；DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/9 8:0:8組卷：2引用：3難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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