啟動子可分為組成型啟動子和誘導(dǎo)型啟動子。³⁵S啟動子是組成型啟動子，能夠持續(xù)、高效地啟動目的基因在植物各種組織中表達(dá)，但往往也會阻礙植物的生長發(fā)育；Rd29A啟動子是一種逆境誘導(dǎo)型啟動子。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強(qiáng)的抗旱作用。科研人員構(gòu)建Rd29A啟動子驅(qū)動AmDHN基因表達(dá)的載體，過程如圖1，再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化“敖漢苜?！迸嘤秃敌缕贩N，以期在干旱地區(qū)發(fā)展苜蓿產(chǎn)業(yè)。請回答下列問題：

注：neo^r是新霉素抗性基因，aadA是鏈霉素抗性基因。
（1）Rd29A啟動子的基本組成單位是

脫氧核苷酸

脫氧核苷酸

；能識別啟動子的酶是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

。
（2）科研人員擴(kuò)增Rd29A啟動子所設(shè)計(jì)的引物如下，根據(jù)引物的堿基序列及限制酶的識別序列分析，構(gòu)建載體2時選用的限制酶是

SmaⅠ和SacⅠ

SmaⅠ和SacⅠ

。
上游引物P1：5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3'
下游引物P2：5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3'
（3）選用

BclⅠ、SacⅠ

BclⅠ、SacⅠ

酶切割載體1、2，構(gòu)建載體3的成功率較高。研究人員在保存目的基因AmDHN時，構(gòu)建載體4導(dǎo)入大腸桿菌的優(yōu)點(diǎn)有

①②④

①②④

。
①穩(wěn)定保存
②準(zhǔn)確復(fù)制
③快速表達(dá)
④方便取用
（4）載體5需先轉(zhuǎn)入

農(nóng)桿菌

農(nóng)桿菌

后再轉(zhuǎn)化苜蓿，轉(zhuǎn)化后應(yīng)在培養(yǎng)基中添加

新霉素

新霉素

篩選轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織。
（5）為檢測轉(zhuǎn)基因苜蓿中AmDHN基因的轉(zhuǎn)錄水平，挑選10株轉(zhuǎn)基因植株，利用自來水和20%PEG（模擬干旱條件）處理8h,提取RNA通過RT-PCR檢測AmDHN基因和MtActin基因（一種骨架蛋白基因）的表達(dá)水平，其結(jié)果如圖2：

①選擇MtActin基因轉(zhuǎn)錄水平作為參照的依據(jù)是MtActin基因在各種細(xì)胞中表達(dá)相對恒定。
②自來水處理和20%PEG條件下的AmDHN基因表達(dá)水平的差異說明

干旱能誘導(dǎo)Rd29A啟動子啟動轉(zhuǎn)錄

干旱能誘導(dǎo)Rd29A啟動子啟動轉(zhuǎn)錄

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