M蛋白（由M基因編碼）是一類廣泛存在于動植物中的金屬結合蛋白，具有吸附重金屬的作用，M基因能在大腸桿菌和動物A的肝細胞中特異性表達?，F(xiàn)設計實驗如下：
1實驗一：科研人員將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過一定的技術手段獲得M基因失活的轉基因克隆動物A，流程如圖1所示。
2實驗二：將M基因導入大腸桿菌構建具有吸附重金屬的作用的工程菌，如圖2所示。
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（1）在構建含有片段F的重組質粒過程中，用于切割質粒DNA的工具酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵斷開。
（2）在進行動物A成纖維細胞培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是 清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害（同時給細胞提供足夠的營養(yǎng)）清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害（同時給細胞提供足夠的營養(yǎng)）。
（3）鑒定轉基因動物：通過動物細胞融合等技術制備M蛋白的單克隆抗體，簡要寫出利用此抗體確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路。 取動物A和克隆動物A的肝組織細胞，分別提取蛋白質進行抗原—抗體雜交取動物A和克隆動物A的肝組織細胞，分別提取蛋白質進行抗原—抗體雜交。
（4）根據(jù)M蛋白cDNA的核苷酸序列設計了相應的引物（圖2甲），通過PCR擴增M基因。已知A位點和B位點分別是起始密碼子和終止密碼子對應的基因位置。選用的引物組合應為 引物a和引物d引物a和引物d。實驗二中，PCR所用的DNA聚合酶擴增出的M基因的末端為平末端。由于載體E只有能產(chǎn)生黏性末端的酶切位點，需借助中間載體P將M基因接入載體E。載體P和載體E的酶切位點及相應的酶切序列如圖2乙所示。
①選用 EcoRVEcoRV酶將載體P切開，再用 T4T4DNA連接酶將M基因與載體P相連，構成重組載體P′。
②由于載體P'不具有表達M基因的 啟動子和終止子啟動子和終止子故應該選用 XhoⅠ和PstⅠXhoⅠ和PstⅠ酶組合對載體P'和載體E進行酶切，將切下的M基因和載體E用DNA連接酶進行連接，將得到的混合物導入到用 Ca2+Ca2+處理的大腸桿菌，篩出M工程菌。
（5）M基因在工程菌的表達量如圖3所示。請回答該結果能否說明已經(jīng)成功構建了具有較強吸附廢水中重金屬能力的工程菌的理由并說明原因？不能不能，因為尚未在個體生物學水平上對M工程菌吸附重金屬的能力進行鑒定因為尚未在個體生物學水平上對M工程菌吸附重金屬的能力進行鑒定。
【答案】磷酸二酯鍵；清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害（同時給細胞提供足夠的營養(yǎng)）；取動物A和克隆動物A的肝組織細胞，分別提取蛋白質進行抗原—抗體雜交；引物a和引物d；EcoRV；T4；啟動子和終止子；XhoⅠ和PstⅠ；Ca2+；不能；因為尚未在個體生物學水平上對M工程菌吸附重金屬的能力進行鑒定
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/11 8:0:9組卷：18引用：3難度：0.5
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2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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