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科學家應用抗旱基因培育出了耐旱玉米新品系,為解決我國糧食問題做出了重要貢獻。若測得某耐旱基因(mt1D)編碼鏈首端到末端(其中一條鏈)的序列為5'-ATCTACGCGCTCATCCG …(省略3n個核苷酸序列)……CGCAGCAATGAGTAGCG-3'。如圖1為構建重組質粒的過程示意圖,BamHⅠ、BclⅠ、SmaⅠ、Sau3AⅠ為限制酶(四種酶的識別序列詳見表),箭頭表示轉錄方向?;卮鹣铝袉栴}:
限制酶 BamHⅠ BclⅠ SmaⅠ Sau3AⅠ
識別序列及切割位點(5′→3′) G↓GATCC T↓GATCA CCC↓GGG ↓GATC
菁優(yōu)網(wǎng)?
(1)為獲取更多mtlD基因,可采用PCR技術擴增,在反應體系中除加入引物、dNTP、緩沖液、Mg2+外,還需要加入
模板、耐高溫的DNA聚合酶
模板、耐高溫的DNA聚合酶
。某同學設計了如下六種PCR引物,其中適合選用的一對引物是
②④
②④
(選填序號)。
①5′-GACTACTCGCGCATCTA-3′
②5′-ATCTACGCGCTCATCCG-3′
③5′-GCGATGAGTAACGACGC-3′
④5′-CGCTACTCATTGCTGCG-3′
⑤5′-TAGATGCGCGAGTAGGC-3′
⑥5′-CGCAGCAATGAGTAGCG-3′
(2)若PCR反應得到的非特異性擴增產(chǎn)物偏多,從引物設計和溫度控制角度考慮,主要原因可能是
退火溫度低,引物設計不恰當
退火溫度低,引物設計不恰當
。
(3)為將圖中質粒A和mtlD基因正確連接構建重組質粒B,設計mtlD基因的引物時,在兩種引物的5′端分別添加
BamHⅠ、SmaⅠ
BamHⅠ、SmaⅠ
限制酶的識別序列,選用
BclⅠ、SmaⅠ
BclⅠ、SmaⅠ
限制酶切割質粒A,酶切后的載體和目的基因片段通過
T4DNA連接
T4DNA連接
酶作用后獲得重組質粒。為了篩選出轉入了重組質粒的受體細胞,應首先在篩選平板培養(yǎng)基添加
四環(huán)素
四環(huán)素
,再將平板上長出的菌落通過影印平板法接種到添加
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的平板培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)觀察。
(4)若從平板上長出的菌落中提取重組質粒B利用Sau3AⅠ進行完全酶切,最多可以得到
3
3
種大小不同的DNA片段。
(5)圖2是對重組質粒測序的部分序列,若目的基因與質粒正確連接,則圖中M連接處的序列正確的是
Q3
Q3
,填序列編號)。

【答案】模板、耐高溫的DNA聚合酶;②④;退火溫度低,引物設計不恰當;BamHⅠ、SmaⅠ;BclⅠ、SmaⅠ;T4DNA連接;四環(huán)素;氨芐青霉素;3;Q3
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/8/25 4:0:8組卷:18引用:1難度:0.6
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    菁優(yōu)網(wǎng)
    (1)獲得轉基因抗鹽煙草新品種過程中應用的生物技術有
     
    (答出2項)等。
    (2)為確保目的基因定向插入了質粒,應該選擇
     
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    (填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”)對目的基因進行篩選。
    (3)培育轉基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程
     
    (填序號)。過程②③采用的方法是
     
    。
    (4)⑤過程需要用到
     
    等植物激素,在誘導愈傷組織分化成幼苗的過程中,這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化,原因是
     
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    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
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    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
    菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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