利用新冠病毒（SARS-CoV-2）包膜表面的S蛋白研發(fā)的疫苗已在我國(guó)廣泛接種。如圖表示制備疫苗的相關(guān)過(guò)程，其中m、n分別是啟動(dòng)子和終止子，箭頭處是限制酶的切點(diǎn)，SUC2是酵母菌的蔗糖轉(zhuǎn)化酶基因，其終產(chǎn)物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成單糖被細(xì)胞利用。下表是可供選擇使用的限制酶及其識(shí)別序列和切割位點(diǎn)。

限制酶	BamHⅠ	NheⅠ	NcoⅠ	SphⅠ	Sau3AⅠ
識(shí)別序列和切割位點(diǎn)	5′-G↓CTAGC-3′	5′-G↓GATCC-3′	5′-C↓CATGG-3′	5′-GCATG↓C-3′	5′-↓GATC-3′

（1）上圖②過(guò)程所使用的兩種酶是

NheI、NcoI

NheI、NcoI

，選擇兩種酶切割的優(yōu)點(diǎn)是

形成不同的黏性末端，防止質(zhì)粒及目的基因自連及目的基因反接

形成不同的黏性末端，防止質(zhì)粒及目的基因自連及目的基因反接

。
（2）由上圖推測(cè)，目的基因S表達(dá)的模板鏈?zhǔn)莂鏈，理由是

目的基因的a鏈位于重組質(zhì)粒的內(nèi)側(cè)，b鏈位于外側(cè)，轉(zhuǎn)錄方向?yàn)閙→n,且轉(zhuǎn)錄只能從模板鏈的為3'端開(kāi)始，因此a鏈?zhǔn)悄０彐?/div>

目的基因的a鏈位于重組質(zhì)粒的內(nèi)側(cè)，b鏈位于外側(cè)，轉(zhuǎn)錄方向?yàn)閙→n,且轉(zhuǎn)錄只能從模板鏈的為3'端開(kāi)始，因此a鏈?zhǔn)悄０彐?/div>；該目的基因的表達(dá)離不開(kāi)m,原因是

基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯，啟動(dòng)子m是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄

基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯，啟動(dòng)子m是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄

。
（3）RT-PCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄（RT）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。利用S蛋白的RNA作為模板進(jìn)行過(guò)程①，首先需要加入緩沖液、原料、酶Ⅰ、引物Ⅰ等物質(zhì)后進(jìn)行RT，獲得單鏈DNA后，還需要添加與單鏈DNA互補(bǔ)的引物Ⅱ及酶Ⅱ，在PCR過(guò)程中酶Ⅰ所處的狀態(tài)是

失活

失活

。以一個(gè)單鏈DNA為起點(diǎn)，進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上需要

2^n-1

2^n-1

個(gè)引物Ⅱ；PCR每次循環(huán)一般可以分為變性、

復(fù)性

復(fù)性

、延伸三步。
（4）SUC2作為B上的標(biāo)記基因，可以對(duì)導(dǎo)入B的酵母菌進(jìn)行篩選。篩選時(shí)，需要使用以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基，對(duì)受體突變型酵母菌的要求是

不含SUC2基因或者SUC2基因被敲除

不含SUC2基因或者SUC2基因被敲除

。
（5）與普通滅活或減活疫苗相比，上述方法制備的疫苗對(duì)人體更安全，主要原因是

此疫苗不含新冠病毒的核酸，不會(huì)在人體內(nèi)增殖，僅注射病毒的部分蛋白進(jìn)入人體，更安全

此疫苗不含新冠病毒的核酸，不會(huì)在人體內(nèi)增殖，僅注射病毒的部分蛋白進(jìn)入人體，更安全

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