回答下列基因工程的問題．100多年前，“疫苗之父”巴斯德開創(chuàng)了第一次疫苗革命，其特點(diǎn)是接種滅活或減毒的病原微生物．20世紀(jì)70年代開始，現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展開創(chuàng)了第二次疫苗革命，使疫苗的研制進(jìn)入分子水平．圖一是1986年通過基因工程制備乙型肝炎表面抗原（HbsAg）從而獲得乙肝疫苗的過程．

在圖一中步驟①和③的過程中，需要用合適的限制酶切割乙肝表面抗原基因和質(zhì)粒．現(xiàn)將乙肝表面抗原基因及質(zhì)粒的部分限制酶的識別序列及位置表示為圖二．質(zhì)粒中的啟動子是質(zhì)粒中基因得以正常表達(dá)所必需的部分．lacZ基因合成某種酶，該酶能將無色染料X-gal變成藍(lán)色，最終能在無色染料X-gal的培養(yǎng)基上將含該基因的菌落染成藍(lán)色．

限制酶	EcoR	BclⅠ	BamHⅠ	HindⅢ
識別序列及切割位點(diǎn)	G↓AATTC	T↓GATCA	G↓GATCC	A↓AGCTT

（1）為了避免自身環(huán)化及便于篩選，則切割質(zhì)粒選用的限制酶是

BamHⅠ和HindⅢ

BamHⅠ和HindⅢ

，切割乙肝表面抗原基因選用的限制酶是

BclⅠ和HindⅢ

BclⅠ和HindⅢ

．
（2）為篩選含有乙肝表面抗原的大腸桿菌細(xì)胞，需要將導(dǎo)入操作之后的大腸桿菌接種到含

氨芐青霉素和無色染料X-gal

氨芐青霉素和無色染料X-gal

的固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，挑選

未被染上藍(lán)色的菌落

未被染上藍(lán)色的菌落

的菌落純化培養(yǎng)．
（3）下列有關(guān)限制酶的敘述中，正確的是

CD

CD

（多選）
A．限制酶催化的反應(yīng)類型是氧化分解反應(yīng)
B．限制酶破壞的是氫鍵
C．一種限制酶只能識別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列
D．EcoR酶與HindⅢ酶相比較，EcoR酶切割后DNA片段較容易分離
（4）在圖一中步驟④中，使用基因工程工具酶是

DNA連接酶

DNA連接酶

．一個乙肝表面抗原基因與一個質(zhì)粒重組的過程中（圖一的步驟④），游離的磷酸基團(tuán)數(shù)目減少

4

4

個
（5）通過基因工程生產(chǎn)的疫苗與滅活或減毒的病原微生物的疫苗，在安全性方面的比較結(jié)果及理由是

基因工程疫苗更安全，因?yàn)橐呙绯煞种兄缓《镜鞍?，不含病毒核酸，不會出現(xiàn)病毒侵染的情況

基因工程疫苗更安全，因?yàn)橐呙绯煞种兄缓《镜鞍祝缓《竞怂?，不會出現(xiàn)病毒侵染的情況

．