In-Fusion技術(shù)是一項新型的無縫克隆技術(shù)。該技術(shù)關(guān)鍵是要在目的基因兩端構(gòu)建與線性化質(zhì)粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常為15-20bp），然后用In-Fusion 酶處理即可實現(xiàn)無縫連接。它的操作步驟大致為：①質(zhì)粒線性化；②PCR擴(kuò)增出兩端含線性化質(zhì)粒同源序列的目的基因；③目的基因與線性化質(zhì)粒同源區(qū)域在In-Fusion酶作用下形成重組質(zhì)粒；④將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞。
（1）過程①中需要用到的酶有 TaqDNA聚合酶TaqDNA聚合酶。另外，利用 限制酶限制酶處理也可以直接得到線性化質(zhì)粒。
（2）據(jù)圖分析，為保證擴(kuò)增出所需的目的基因，引物A或引物B要依據(jù) 目的基因和質(zhì)粒目的基因和質(zhì)粒序列進(jìn)行設(shè)計。過程②經(jīng)過 33輪循環(huán)即可初步得到符合要求的目的基因片段。
（3）過程③中，同源序列1、2中的堿基排序不同，這樣設(shè)計的好處是 防止目的基因反向連接；防止線性化質(zhì)?；蚰康幕虻淖陨憝h(huán)化防止目的基因反向連接；防止線性化質(zhì)?；蚰康幕虻淖陨憝h(huán)化。圖示In-Fusion技術(shù)可作為模型使用，一般來說只需要改變圖中的 引物A和引物B引物A和引物B，即可快速構(gòu)建出另一種目的基因的重組質(zhì)粒。
（4）若目的基因是氨芐青霉素抗性基因，以大腸桿菌作為受體細(xì)胞時，過程④需要用 Ca2+Ca2+處理大腸桿菌。為檢測已轉(zhuǎn)化大腸桿菌的抗性效果，在含氨芐青霉素的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，分別用顯微鏡計數(shù)法和 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)，若計數(shù)結(jié)果分別是M、N，則致死率可用（ M-N）/Mx 100%表示，此結(jié)果較真實值偏大，原因是 在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】TaqDNA聚合酶；限制酶；目的基因和質(zhì)粒；3；防止目的基因反向連接；防止線性化質(zhì)粒或目的基因的自身環(huán)化；引物A和引物B；Ca2+；稀釋涂布平板；在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：29引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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