結核病是由結核桿菌引起的人畜共患病。結核桿菌通常以氣溶膠形式傳播，氣溶膠顆粒被肺泡吞噬細胞吞噬，吞噬細胞破裂導致結核桿菌在機體內進一步傳播。羊癢病是由正常細胞的非致病性朊蛋白異構化為癢病朊蛋白所致。為研制既能抗結核病又能抗羊癢病的雙抗羊，科學家進行了如圖操作。
（1）小鼠SP110基因是目前發(fā)現的具有抗結核桿菌感染功能的基因。為了驗證SP110基因的功能，同時也為了驗證山羊吞噬細胞特異性啟動子MSR可以啟動SP110基因在吞噬細胞內的表達，設計以下三組實驗。實驗組將MRS啟動子與小鼠SP110基因形成融合基因，用 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶將融合基因與質粒構建成重組質粒，導入山羊肺泡吞噬細胞（組2）。以 轉入廣泛表達小鼠SP110基因的重組質粒的山羊吞噬細胞轉入廣泛表達小鼠SP110基因的重組質粒的山羊吞噬細胞（組3）和轉入空質粒的山羊吞噬細胞為對照組（組1）。分別接種等量的結核桿菌，72h后加入 蒸餾水蒸餾水使吞噬細胞破裂，取裂解液進行涂布培養(yǎng)，結果如圖1。由圖可知小鼠SP110基因可用于雙抗羊的研制，依據是 組2的吞噬細胞裂解后釋放的結核桿菌數量與組3接近，顯著小于組1組2的吞噬細胞裂解后釋放的結核桿菌數量與組3接近，顯著小于組1。
（2）非致病性朊蛋白是由山羊13號染色體上的PRNP基因的第三外顯子控制合成的，PRNP基因的結構如圖2。以L4和R1為識別位點設計TALEN敲除載體，對山羊成纖維細胞L4與R1之間的序列實施定點敲除。然后，將TALEN敲除載體與供體DNA載體共轉化幼羊成纖維細胞，可將SP110基因定點敲入PRNP基因的第三外顯子中，原理如圖3。請指出圖4中的數字分別代表的結構。1 L4序列L4序列，2 MRS啟動子MRS啟動子，3 終止子終止子，4 R1序列R1序列。經 抗原抗體雜交技術抗原抗體雜交技術檢測，山羊成纖維細胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表達情況是 均降低（不表達）均降低（不表達）。
（3）欲用上述細胞獲得雙抗羊，需要用到的技術有 體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）、胚胎移植體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）、胚胎移植（至少寫出三項）。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶和DNA連接酶；轉入廣泛表達小鼠SP110基因的重組質粒的山羊吞噬細胞；蒸餾水；組2的吞噬細胞裂解后釋放的結核桿菌數量與組3接近，顯著小于組1；L4序列；MRS啟動子；終止子；R1序列；抗原抗體雜交技術；均降低（不表達）；體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）、胚胎移植
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/2 8:0:9組卷：16引用：3難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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