圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒,其中tar為硫鏈絲菌素(一種抗生素)抗性基因;mel為黑色素合成基因,其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落;而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識(shí)別序列?;卮鹣铝袉?wèn)題。
表1
pU702pZHZ8 |
BglI5.7kb6.7kb |
固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度(ug/mL) | 0 | 1 | 2 | 5 | 10 |
不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長(zhǎng)狀況 | +++++ | +++ | + | - | - |
(1)限制性核酸內(nèi)切酶可以識(shí)別雙鏈DNA中特定核苷酸序列,并使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
斷裂,切割形成的末端有 黏性末端和平末端
黏性末端和平末端
兩種。(2)以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因,與質(zhì)粒pIJ702上長(zhǎng)度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換,構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長(zhǎng)度見(jiàn)表1。由此判斷目的基因的片段長(zhǎng)度為
1.4
1.4
kb,判定目的基因中含有一個(gè)BglⅡ切割位點(diǎn)的理由是 pIJ702上的原有BglII位點(diǎn)被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8,仍能被BglII切割成一條線段
pIJ702上的原有BglII位點(diǎn)被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8,仍能被BglII切割成一條線段
。(3)導(dǎo)入目的基因時(shí),首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞,再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成
轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
過(guò)程。(4)不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞,所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
5
5
μg/mL以上,挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是 根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點(diǎn),通過(guò)觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選
根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點(diǎn),通過(guò)觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選
。若要檢測(cè)整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用,第一步需檢測(cè)受體細(xì)胞的 RNA
RNA
(填“DNA”或“RNA”),檢測(cè)方法應(yīng)采用 分子雜交
分子雜交
技術(shù)。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】磷酸二酯鍵;黏性末端和平末端;1.4;pIJ702上的原有BglII位點(diǎn)被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8,仍能被BglII切割成一條線段;轉(zhuǎn)化;5;根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點(diǎn),通過(guò)觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選;RNA;分子雜交
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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