CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)等新技術(shù)被用于水稻等作物改良。sgRNA和Cas9蛋白是CRISPR/Cas9系統(tǒng)的核心，sgRNA是根據(jù)靶基因設(shè)計(jì)合成的向?qū)NA，引導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)靶基因進(jìn)行剪切，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因定點(diǎn)編輯。
（1）CRISPR/Cas9系統(tǒng)廣泛存在于自然界的細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，推測(cè)其作用是 切割外源DNA，保護(hù)自身切割外源DNA，保護(hù)自身。CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的sgRNA可與目標(biāo)DNA結(jié)合，依據(jù)的原理是 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)有時(shí)存在編輯對(duì)象出錯(cuò)而造成“脫靶”，sgRNA的識(shí)別序列越短，脫靶率越高，請(qǐng)分析原因 識(shí)別序列短，特異性差，易與非目的片段結(jié)合造成編輯出錯(cuò)識(shí)別序列短，特異性差，易與非目的片段結(jié)合造成編輯出錯(cuò)。
（2）雜交水稻的培育常用到雄性不育系。水稻是兩性花，其雄性育性受基因控制，但高溫會(huì)導(dǎo)致花粉敗育。科研人員發(fā)現(xiàn)兩株溫敏型雄性不育突變株M和N，其雄性不育的起點(diǎn)溫度分別為25℃、21℃?？紤]到大田中環(huán)境溫度會(huì)有波動(dòng)，制備水稻雜交種子時(shí)，選用植株N作母本進(jìn)行雜交更合適，理由是 N植株雄性不育的起點(diǎn)溫度更低，受粉時(shí)出現(xiàn)雄性可育的情況更少，不易出現(xiàn)自交和雜交種混雜的現(xiàn)象N植株雄性不育的起點(diǎn)溫度更低，受粉時(shí)出現(xiàn)雄性可育的情況更少，不易出現(xiàn)自交和雜交種混雜的現(xiàn)象。
（3）為培育不受溫度影響的雄性不育株，科學(xué)家利用CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)，將純合野生稻（2N）甲中的冷敏型基因g改造為耐冷型基因G，篩選得到純合耐冷突變體乙。同時(shí)利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將抗蟲基因（H）轉(zhuǎn)入不抗蟲野生稻中，外源抗蟲基因可插入到不同的染色體上，培育得到純合抗蟲水稻丙和丁?？蒲腥藛T進(jìn)行如表所示實(shí)驗(yàn)。
| 實(shí)驗(yàn) | 親本 | F1表型 | F2表型及數(shù)量 |
| A | 甲×乙 | 耐冷型 | 耐冷型280，冷敏型200 |
| B | 丙×丁 | 全抗蟲 | 抗蟲1502，不抗蟲99 |
實(shí)驗(yàn)方案：將實(shí)驗(yàn)A中F1植株與植株甲進(jìn)行正反交實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)子代表型及比例。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：F1植株作母本時(shí)，子代耐冷型：冷敏型=1：1；反交實(shí)驗(yàn)中，子代耐冷型：冷敏型=1：5
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：F1植株作母本時(shí)，子代耐冷型：冷敏型=1：1；反交實(shí)驗(yàn)中，子代耐冷型：冷敏型=1：5
實(shí)驗(yàn)方案：將實(shí)驗(yàn)A中F1植株與植株甲進(jìn)行正反交實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)子代表型及比例。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：F1植株作母本時(shí)，子代耐冷型：冷敏型=1：1；反交實(shí)驗(yàn)中，子代耐冷型：冷敏型=1：5
。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：F1植株作母本時(shí)，子代耐冷型：冷敏型=1：1；反交實(shí)驗(yàn)中，子代耐冷型：冷敏型=1：5
②實(shí)驗(yàn)B的F2出現(xiàn)該性狀比的原因是
丙和丁植株抗蟲基因位于非同源染色體上且遵循自由組合定律
丙和丁植株抗蟲基因位于非同源染色體上且遵循自由組合定律
。【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．
【答案】切割外源DNA，保護(hù)自身；堿基互補(bǔ)配對(duì)；識(shí)別序列短，特異性差，易與非目的片段結(jié)合造成編輯出錯(cuò)；N植株雄性不育的起點(diǎn)溫度更低，受粉時(shí)出現(xiàn)雄性可育的情況更少，不易出現(xiàn)自交和雜交種混雜的現(xiàn)象；實(shí)驗(yàn)方案：將實(shí)驗(yàn)A中F1植株與植株甲進(jìn)行正反交實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)子代表型及比例。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：F1植株作母本時(shí)，子代耐冷型：冷敏型=1：1；反交實(shí)驗(yàn)中，子代耐冷型：冷敏型=1：5；丙和丁植株抗蟲基因位于非同源染色體上且遵循自由組合定律
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：F1植株作母本時(shí)，子代耐冷型：冷敏型=1：1；反交實(shí)驗(yàn)中，子代耐冷型：冷敏型=1：5；丙和丁植株抗蟲基因位于非同源染色體上且遵循自由組合定律
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：34引用：3難度：0.6
相似題
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1．學(xué)習(xí)以下材料，回答（1）～（4）題。
利用抑制性tRNA進(jìn)行無(wú)義突變遺傳病的治療
無(wú)義突變是由于某個(gè)堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子（UAA、UAG或UGA），從而使肽鏈合成提前終止，造成蛋白質(zhì)的功能改變，引發(fā)相關(guān)疾病。約有10%～15%的人類基因相關(guān)遺傳疾病是由無(wú)義突變引發(fā)的。常規(guī)的基因治療是將正?；虻腸DNA序列或是有治療價(jià)值的基因（如CRISPR-Cas9相關(guān)的基因編輯工具）通過一定的方式導(dǎo)入人體靶細(xì)胞內(nèi)，達(dá)到替代或修復(fù)缺陷基因、治療疾病的目的。導(dǎo)入基因插入位置不當(dāng)、過高或過低表達(dá)，都可能會(huì)導(dǎo)致副作用。盡管基因編輯可以實(shí)現(xiàn)生理水平的基因表達(dá)，但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)仍然是巨大的挑戰(zhàn)。
抑制性tRNA（sup-tRNA）由天然tRNA改造而來(lái)，它的反密碼子通過堿基配對(duì)原則可以識(shí)別無(wú)義突變的終止密碼子，使得mRNA在翻譯至無(wú)義突變位點(diǎn)時(shí)不啟動(dòng)翻譯終止而是繼續(xù)向后進(jìn)行翻譯，獲得有功能的全長(zhǎng)蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因，是相關(guān)基因發(fā)生無(wú)義突變，產(chǎn)生終止密碼子UAG。研究者構(gòu)建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體（圖1），以及針對(duì)該無(wú)義突變?cè)O(shè)計(jì)的sup-tRNA表達(dá)載體（產(chǎn)生的sup-tRNA能夠識(shí)別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡(jiǎn)寫作sup-tRNATyr），將其導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)與具有相似作用的化合物G418比較，sup--tRNA的作用更加顯著（圖2）；進(jìn)一步利用重組腺相關(guān)病毒作為載體將sup-tRNA導(dǎo)入患病小鼠模型中，實(shí)驗(yàn)顯示能夠降低黏多糖過度積存，實(shí)現(xiàn)對(duì)該病癥的有效治療，其療效可以持續(xù)半年以上。
從整體來(lái)看，G418在促進(jìn)跨越無(wú)義突變位點(diǎn)繼續(xù)翻譯時(shí)引入的氨基酸較為隨機(jī)，而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一，且不會(huì)影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài)，所以sup-tRNA在個(gè)體治療中具有很高的安全性，因而在未來(lái)基因突變引起的疾病相關(guān)治療中具有非常大的應(yīng)用前景。
（1）侵染時(shí)，作為載體的重組腺相關(guān)病毒與靶細(xì)胞膜上的發(fā)生識(shí)別，引發(fā)內(nèi)吞，進(jìn)入細(xì)胞后釋放單鏈DNA作為模板，利用宿主細(xì)胞的催化合成其互補(bǔ)DNA鏈，再經(jīng)過過程產(chǎn)生sup-tRNA。
（2）除了引入的氨基酸較為單一，不影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài)，我們還可推斷，用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處（填“能”或“不能”）繼續(xù)往后翻譯，具有很高的安全性。
（3）研究者構(gòu)建mldua突變基因和Flag基因融合的載體，目的是通過檢測(cè)來(lái)確定是否跨越無(wú)義突變位點(diǎn)繼續(xù)向后翻譯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，相比于化合物G418，sup-tRNA在促進(jìn)無(wú)義突變位點(diǎn)的翻譯方面更加有效，支持這一結(jié)論的依據(jù)是：。
（4）有文獻(xiàn)報(bào)道，已在近1000個(gè)不同的人類基因中發(fā)現(xiàn)了7500多個(gè)無(wú)義突變。常規(guī)的基因治療需要為每種疾病設(shè)計(jì)獨(dú)特的治療策略，這將是一項(xiàng)耗費(fèi)驚人的項(xiàng)目。據(jù)此說明sup-tRNA的應(yīng)用價(jià)值。發(fā)布：2025/1/3 8:0:1組卷：27引用：1難度：0.6 -
2．人類基因組計(jì)劃測(cè)定了人體的24條染色體，這24條染色體是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 0:30:1組卷：112引用：7難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，自然界有些植物能產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶催化幾丁質(zhì)水解從而抵抗真菌感染。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入沒有抗性的植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌的能力。如圖表示為獲取幾丁質(zhì)酶基因而建立cDNA文庫(kù)的過程。
（1）圖示以mRNA為材料通過法獲得cDNA，該方法依據(jù)的原理是，通過這種方法獲得的基因中因缺乏和結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致將其直接導(dǎo)入受體細(xì)胞中不能復(fù)制和表達(dá)。
（2）與選用老葉相比，選用嫩葉更容易提取到mRNA，原因是，且提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（3）將從cDNA文庫(kù)中獲得的幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體用酶和DNA連接處理后連接起來(lái)，構(gòu)建基因表達(dá)載體，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：5引用：1難度：0.7