糖化酶是將淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖的酶，大部分野生酵母菌因缺乏糖化酶基因而不能直接利用淀粉。研究人員將經(jīng)誘變處理后獲取的黑曲霉菌高產(chǎn)糖化酶基因?qū)氘叧嘟湍窩S115（對氨芐青霉素不敏感）中，構(gòu)建能直接利用淀粉的工程菌，該過程所用質(zhì)粒（僅示部分結(jié)構(gòu)）如圖1所示。質(zhì)粒的外側(cè)鏈為a鏈，內(nèi)側(cè)鏈為b鏈?；駻mp^r轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于b鏈的片段。請回答下列問題。
?
（1）經(jīng)誘變獲得高產(chǎn)菌株后，獲取高產(chǎn)糖化酶基因并對其進(jìn)行PCR擴(kuò)增，為了方便切割且能夠準(zhǔn)確和運載體結(jié)合，需要在兩種引物的

5′

5′

（5′或3′）端連接限制酶

BamHI和Xbal

BamHI和Xbal

識別的序列。擴(kuò)增過程中需要

耐高溫DNA聚合酶/Taq酶

耐高溫DNA聚合酶/Taq酶

催化。
（2）將高產(chǎn)糖化酶基因表達(dá)載體導(dǎo)入畢赤酵母，并且在其細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

。高產(chǎn)糖化酶基因表達(dá)時，

RNA聚合

RNA聚合

酶識別啟動子并與啟動子結(jié)合開啟轉(zhuǎn)錄，其轉(zhuǎn)錄時的模板鏈屬于

a

a

鏈的片段。
（3）畢赤酵母GS115是一種組氨酸營養(yǎng)缺陷型微生物，自身不能合成生長必需的組氨酸，因此可利用

不含組氨酸

不含組氨酸

的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（不含淀粉）初步篩選導(dǎo)入高產(chǎn)糖化酶基因表達(dá)載體的畢赤酵母GS115，再將篩選出的細(xì)胞轉(zhuǎn)接至含

甲醇

甲醇

的培養(yǎng)液（含淀粉）中進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶性能測定。