如圖為某課題組用生物技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因小鼠的過程。回答下列問題。

（1）用PCR技術(shù)擴增目的基因時，為了便于擴增的片段與表達載體連接，需在引物的5'端加上

限制酶的酶切位點（識別序列）

限制酶的酶切位點（識別序列）

；設(shè)計引物的前提是

要有一段已知目的基因的核苷酸序列

要有一段已知目的基因的核苷酸序列

。若通過擴增獲得只含目的基因的片段，至少需要循環(huán)

3

3

次。
（2）通常把目的基因轉(zhuǎn)入雄原核而不是雌原核，從兩者形態(tài)差異上分析，原因是

雄原核較大，更容易容納外源DNA

雄原核較大，更容易容納外源DNA

。
（3）把早期胚胎植入假孕母鼠子宮前，需要對胚胎進行性別鑒定，目前最有效的方法是SRY-PCR法。其中，要選用囊胚時期的

滋養(yǎng)層

滋養(yǎng)層

細胞進行鑒定。
（4）移植的胚胎能夠在假孕母鼠體內(nèi)存活的生理學(xué)基礎(chǔ)是

受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

。
（5）檢測目的基因在子代轉(zhuǎn)基因小鼠中是否成功表達出特定蛋白質(zhì)，常用抗原—抗體雜交技術(shù)，其具體操作是

從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進行抗原-抗體雜交，如果出現(xiàn)雜交帶，表明目的基因已經(jīng)表達成功

從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進行抗原-抗體雜交，如果出現(xiàn)雜交帶，表明目的基因已經(jīng)表達成功

。