PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0.9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達該蛋白。回答下列問題：
相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點（注：箭頭表示切割位點）
| 名稱 | 識別序列及切割位點 | 名稱 | 識別序列及切割位點 |
| HindⅢ | A↓AGCTT TTCGA↑A |
EcoRⅠ | G↓AATTCCTTAA↑G |
| PvitⅡ | CAG↓CTGGTC↑GAC | PstⅠ | CTGC↓AG GA↑CGTC |
| KpnⅠ | G↓GTACCCCATG↑G | BamHⅠ | G↓GATCCCCTAG↑G |
EcoRⅠ和
EcoRⅠ和
和 PvitⅠ
PvitⅠ
兩種不同限制酶的識別序列。對于酶切的phb2基因和載體進行連接，選擇兩種限制酶切比用一種限制酶切好的原因：可以防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化，也可以防止目的基因和質(zhì)粒的反向連接
可以防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化，也可以防止目的基因和質(zhì)粒的反向連接
。
注：M為指示分子大小的標準參照物；小于0.2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中
（2）將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，隨機挑取單菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖2，
3
3
號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。（3）根據(jù)PHB2cDNA的核苷酸序列設(shè)計了相應(yīng)的引物如圖，通過PCR擴增PHB2基因。已知A位點和B位點分別是起始密碼子和終止密碼子對應(yīng)的基因位置。選用的引物組合應(yīng)為
引物1和引物4
引物1和引物4
，pcr擴增時選取的DNA往往類似于圖，而目的基因往往只是其中的一個片段類似于AB段，當pcr擴增至第四輪循環(huán)時等長的目的基因片段占 1
2
1
2
【考點】基因工程的原理．
【答案】EcoRⅠ和；PvitⅠ；可以防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化，也可以防止目的基因和質(zhì)粒的反向連接；3；引物1和引物4；
1
2
【解答】
【點評】
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