基因編輯是一種新興的比較精確的能對(duì)生物體基因組特定目標(biāo)基因進(jìn)行修飾的一種基因工程技術(shù)或過(guò)程。CRISPR/Cas9系統(tǒng)可對(duì)基因組進(jìn)行定點(diǎn)編輯，其工作原理如圖1所示。人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從血漿中制備，以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑如圖2所示。

（1）據(jù)圖1可知，在sgRNA1和sgRNA2的引導(dǎo)下，Cas9使基因中的

磷酸二酯

磷酸二酯

鍵斷裂，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因序列的編輯。但該技術(shù)有時(shí)存在編輯對(duì)象出錯(cuò)而造成“脫靶”，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)sgRNA的序列長(zhǎng)短影響成功率，越短脫靶率越

高

高

（填“高或“低”）。
（2）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取

總RNA（mRNA）

總RNA（mRNA）

合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用

PCR

PCR

技術(shù)擴(kuò)增HSA基因（序列為5'CTTCGAAATTC-……-TCTCCCGATCGG3'），根據(jù)其兩端序列，則需要選擇的一對(duì)引物序列是

A

A

（填字母）。
A．引物I是5'-CTTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGGGAGA-3'
B．引物I是5'-CTTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-TCTCCCGATCGG-3'
C．引物I是5'-GAAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-AGAGGGCTAGCC-3
D．引物I是5'-GAAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGGGAGA-3'
（3）圖甲為獲取的含有目的基因（HSA基因）的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的切點(diǎn)：圖乙是三種限制酶的識(shí)別序列與酶切位點(diǎn)示意圖；圖丙是Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖。若用BamHI切割圖甲所示的DNA片段，獲得目的基因，則需選用

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

切割圖丙所示質(zhì)粒，以便構(gòu)建基因表達(dá)載體。上述方案存在一定缺陷，故切割圖甲所示DNA片段的最佳方案是選用

EcoRⅠ和BamHⅠ

EcoRⅠ和BamHⅠ

酶。用上述最佳方案構(gòu)建基因表達(dá)載體，所得重組質(zhì)粒

不一定能

不一定能

（選填“能”、“不能”或“不一定能”）被BamHⅢ切割。
（4）啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是

B

B

（填字母）。
A．人血細(xì)胞啟動(dòng)子
B．水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子
C．大腸桿菌啟動(dòng)子
D．農(nóng)桿菌啟動(dòng)子
（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，須確認(rèn)rHSA與

HSA

HSA

的生物學(xué)功能一致。