腦心肌炎病毒（EMCV，其RNA結(jié)構(gòu)如圖1）是引起人腦炎和心肌炎的病原體。為研制疫苗，科研人員按圖2流程培育轉(zhuǎn)基因酵母菌，來(lái)生產(chǎn)EMCV的衣殼蛋白VP1。其中受體酵母菌是組氨酸合成缺陷型，HIS4基因表達(dá)的酶催化組氨酸的合成，G418是一種抗生素。請(qǐng)回答下列問題：

（1）衣殼蛋白VP1的合成基因（目的基因）是將EMCV的RNA經(jīng)過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

合成DNA，該過程與DNA復(fù)制相比，其特有的堿基配對(duì)方式為

U=A

U=A

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（2）目的基因用PCR進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)合圖1分析，應(yīng)先用

已知序列3和4

已知序列3和4

設(shè)計(jì)引物并擴(kuò)增，擴(kuò)增的產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到另一試管中進(jìn)行第二階段反應(yīng)，不在同一試管完成的主要原因是

防止引物配對(duì)特異性不強(qiáng)造成的非特異性擴(kuò)增的污染

防止引物配對(duì)特異性不強(qiáng)造成的非特異性擴(kuò)增的污染

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（3）直接PCR是一種不經(jīng)核酸提取而直接使用動(dòng)物或植物組織等直接進(jìn)行擴(kuò)增的PCR技術(shù)。下列敘述正確的有

BD

BD

。
A、Taq酶與模板DNA上的復(fù)制原點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)PCR過程
B、該方法無(wú)須進(jìn)行繁瑣的標(biāo)本DNA提純的預(yù)處理
C、該方法變性溫度為生物體內(nèi)的最適溫度
D、該方法擴(kuò)增原核生物DNA的效果可能優(yōu)于真核生物
圖3是直接PCR和常規(guī)PCR的電泳圖，泳道1最可能是

直接

直接

PCR結(jié)果。
（4）構(gòu)建重組質(zhì)粒：將NotⅠ切開的載體與添加同源序列的VP1混合，用特定的DNA酶處理形成質(zhì)粒--VP1結(jié)合體（質(zhì)粒2）并導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的

DNA聚合酶、DNA連接

DNA聚合酶、DNA連接

酶等完成質(zhì)粒的環(huán)化。過程③將質(zhì)粒2導(dǎo)入大腸桿菌除前述目的，還能實(shí)現(xiàn)

讓其在大腸桿菌中復(fù)制

讓其在大腸桿菌中復(fù)制

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（5）線性DNA整合到酵母細(xì)胞染色體DNA時(shí)，可能是單拷貝整合，也可能是多拷貝整合。過程⑦先將酵母菌培養(yǎng)在缺乏

組氨酸

組氨酸

的培養(yǎng)基中，篩選獲得導(dǎo)入目的基因的酵母菌；然后將篩選出的酵母菌接種于含2mg?L^-1G418的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，選擇生長(zhǎng)良好的酵母菌再轉(zhuǎn)接到含4mg?L^-1G418的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，其目的是

篩選出目的基因多拷貝整合的酵母菌

篩選出目的基因多拷貝整合的酵母菌

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（6）研究人員用兔抗EMCV血清與酵母細(xì)胞生產(chǎn)的VP1蛋白進(jìn)行抗原—抗體免疫反應(yīng)試驗(yàn)，其目的是

檢測(cè)酵母細(xì)胞生產(chǎn)的VP1與EMCV的VP1的抗原性（結(jié)構(gòu)）是否一致

檢測(cè)酵母細(xì)胞生產(chǎn)的VP1與EMCV的VP1的抗原性（結(jié)構(gòu)）是否一致

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