人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構建及轉染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關限制酶切點，neor為新霉素抗性基因，BLC基因為β-乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答：
（1）過程①的基本原理是先以人乳腺細胞總RNA為模板，通過逆轉錄合成cDNA（互補DNA），再通過PCR技術擴增相應的DNA片段——hLF基因。但是過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因為 hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄，在RT-PCR過程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEB質粒中。
（2）過程③中pEBL質粒經(jīng)脂質體介導進入山羊乳腺上皮細胞依據(jù)的原理是 生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
（3）將轉染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細胞應該是導入了 pEB質?；騪EBL質粒pEB質?；騪EBL質粒的細胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞是否有 綠色熒光綠色熒光以篩選出轉染成功的細胞。
（4）科研過程中，可以用PCR技術檢測受體細胞中的染色體DNA上是否插入了hLF基因或檢測 hLF基因是否轉錄出mRNAhLF基因是否轉錄出mRNA，還可以用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交技術，檢測hLF基因是否翻譯出人乳鐵蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄；5'；SalⅠ和BamHⅠ；生物膜具有一定的流動性；pEB質?；騪EBL質粒；綠色熒光；hLF基因是否轉錄出mRNA；抗原—抗體雜交
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：9引用：2難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6