科研人員通過轉基因技術培育出超量表達P蛋白的轉基因甜玉米。在超量表達P基因載體的構建中，含P基因的DNA片段以及Ti質粒的酶切位點如圖所示，其中強啟動子能驅動基因的持續(xù)轉錄。請回答下列問題。
| 限制酶 | 識別序列 |
| ClaⅠ | 5′-AT↓CGAT-3′ |
| BamHⅠ | 5′-G↓GATCC-3′ |
| HindⅢ | 5′-A↓AGCTT-3′ |
| EcoRⅠ | 5′-G↓AATTC-3′ |
| KpnⅠ | 5′-GGTAC↓C-3′ |
| SacⅠ | 5′-GAGCT↓C-3′ |
dNTP 能為子鏈延伸過程提供能量和原料（或脫氧核苷酸只能作為原料而不能提供能量）
dNTP 能為子鏈延伸過程提供能量和原料（或脫氧核苷酸只能作為原料而不能提供能量）
，同時需加入的酶有 逆轉錄酶和 Taq酶
逆轉錄酶和 Taq酶
。為了特異性擴增P基因序列，需根據 P基因兩端的堿基序列
P基因兩端的堿基序列
設計特異性引物。（2）在構建基因表達載體時，應優(yōu)先選用的限制酶是
BamHⅠ
BamHⅠ
和 Sac I
Sac I
，這樣操作不僅使P基因在玉米植株中超量表達，還可利用T-DNA的 可轉移
可轉移
特性，最終使P基因 整合到玉米細胞染色體上
整合到玉米細胞染色體上
。（3）將農桿菌液浸泡過的玉米愈傷組織進行植物組織培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中需加入
潮霉素
潮霉素
，篩選出的愈傷組織經再分化過程形成叢芽，最終獲得轉基因玉米植株。（4）對轉基因再生玉米植株進行鑒定時發(fā)現(xiàn)，有些植株雖有P基因，但幾乎沒有P蛋白，造成該現(xiàn)象的原因可能有
基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表達
基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表達
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】dNTP 能為子鏈延伸過程提供能量和原料（或脫氧核苷酸只能作為原料而不能提供能量）；逆轉錄酶和 Taq酶；P基因兩端的堿基序列；BamHⅠ；Sac I；可轉移；整合到玉米細胞染色體上；潮霉素；基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂，未能真正轉化成功；雖然轉化成功，但是P基因保持沉默，不能有效表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：32引用：5難度：0.6
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（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達載體中，啟動子是聚合酶識別并結合的部位．若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因導入植物細胞時，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
2．科研人員利用大腸桿菌構建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質粒為載體，構建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達產物能抑制大腸桿菌 DNA 復制。圖中箭頭表示相關限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴增該cDNA時的兩個引物對應的局部序列（前10個堿基序列），并標明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
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