變胖過(guò)程中，胰島B細(xì)胞會(huì)增加。增加的B細(xì)胞可能源于自身分裂（途徑Ⅰ），也可能來(lái)自胰島中干細(xì)胞的增殖、分化（途徑Ⅱ）。科學(xué)家采用胸腺嘧啶類(lèi)似物標(biāo)記的方法，研究了L基因缺失導(dǎo)致肥胖的模型小鼠IK中新增B細(xì)胞的來(lái)源。
（1）EdU和BrdU都是胸腺嘧啶類(lèi)似物，能很快進(jìn)入細(xì)胞并摻入正在復(fù)制的DNA中，摻入DNA的EdU和BrdU均能與

A

A

（用字母表示）互補(bǔ)配對(duì)，并可以被分別檢測(cè)，未摻入的EdU和BrdU短時(shí)間內(nèi)即被降解。
（2）將處于細(xì)胞周期不同階段的細(xì)胞混合培養(yǎng)于多孔培養(yǎng)板中，各孔同時(shí)加入EdU，隨后每隔一定時(shí)間向一組培養(yǎng)孔加入BrdU，再培養(yǎng)十幾分鐘后收集該組孔內(nèi)全部細(xì)胞，檢測(cè)雙標(biāo)記細(xì)胞占EdU標(biāo)記細(xì)胞的百分比（如圖），圖中反映DNA復(fù)制所需時(shí)長(zhǎng)的是從

Q

Q

點(diǎn)到

R

R

點(diǎn)。

（3）為研究變胖過(guò)程中B細(xì)胞的增殖，需使用一批同時(shí)變胖的小鼠。為此，本實(shí)驗(yàn)使用誘導(dǎo)型基因敲除小鼠，即飼喂誘導(dǎo)物后小鼠的L基因才會(huì)被敲除，形成小鼠IK，科學(xué)家利用以下實(shí)驗(yàn)材料制備小鼠IK：
①純合小鼠Lx：小鼠L基因兩側(cè)已插入特異DNA序列（x），但L的功能正常；
②Ce酶基因：源自噬菌體，其編碼的酶進(jìn)入細(xì)胞核后作用于x,導(dǎo)致兩個(gè)x間的DNA片段丟失；
③Er基因：編碼的Er蛋白位于細(xì)胞質(zhì)，與Er蛋白相連的物質(zhì)的定位由Er蛋白決定；
④口服藥T：小分子化合物，可誘導(dǎo)Er蛋白進(jìn)入細(xì)胞核。
請(qǐng)完善制備小鼠IK的技術(shù)路線(xiàn)：

將Ce酶基因和Er基因連接

將Ce酶基因和Er基因連接

→連接到表達(dá)載體→轉(zhuǎn)入小鼠Lx→篩選目標(biāo)小鼠→

飼喂口服藥T

飼喂口服藥T

→獲得小鼠IK。
（4）各種細(xì)胞DNA復(fù)制所需時(shí)間基本相同，但途徑Ⅰ的細(xì)胞周期時(shí)長(zhǎng)（t₁）是途徑Ⅱ細(xì)胞周期時(shí)長(zhǎng)（t₂）的三倍以上。據(jù)此，科學(xué)家先用EdU飼喂小鼠IK，t₂時(shí)間后換用BrdU飼喂，再過(guò)t₂時(shí)間后檢測(cè)B細(xì)胞被標(biāo)記的情況。研究表明，變胖過(guò)程中增加的B細(xì)胞大多數(shù)來(lái)源于自身分裂，與之相應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)是

大多數(shù)B細(xì)胞沒(méi)有被BrdU標(biāo)記

大多數(shù)B細(xì)胞沒(méi)有被BrdU標(biāo)記

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