基因定點(diǎn)整合可替換特定基因，該技術(shù)可用于單基因遺傳病的治療。苯丙酮尿癥是由某基因（A）突變引起的，將正常A基因定點(diǎn)整合到A基因突變的小鼠胚胎干細(xì)胞的染色體DNA上，替換突變基因，可用來(lái)研究該病的基因治療過(guò)程?；蚨c(diǎn)整合的過(guò)程如圖所示，已知neor基因可作為標(biāo)記基因，含有neor的細(xì)胞具有對(duì)G418的抗性?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）構(gòu)建重組載體，常用的工具酶有 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶。構(gòu)建重組載體時(shí)，需要大量A基因，常用 PCRPCR技術(shù)合成A基因，利用該方法合成A基因時(shí)需要設(shè)計(jì)并合成 兩兩種引物。
（2）將重組載體導(dǎo)入患病小鼠胚胎干細(xì)胞的常用方法為 顯微注射法顯微注射法。檢測(cè)患病小鼠胚胎干細(xì)胞中是否導(dǎo)入重組載體的方法是在含有 G418G418的培養(yǎng)液中培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞。
（3）用圖中重組載體轉(zhuǎn)化胚胎干細(xì)胞時(shí)，會(huì)出現(xiàn)A基因錯(cuò)誤整合。錯(cuò)誤整合時(shí)，重組載體上的兩個(gè)HSV-tk至少會(huì)有一個(gè)neor一起整合到染色體DNA上。已知HSV-tk1、HSV-tk2的產(chǎn)物都把DHPG轉(zhuǎn)化成有毒物質(zhì)而使細(xì)胞死亡。將導(dǎo)入重組載體胚胎干細(xì)胞置于同時(shí)含有G418和DHPG的培養(yǎng)，存活下來(lái)的是 正確整合正確整合（填“正確整合”或“錯(cuò)誤整合”）的胚胎干細(xì)胞
（4）將上述篩選得到的胚胎干細(xì)胞培育成轉(zhuǎn)基因小鼠，還需要 早期胚胎培養(yǎng)早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和 胚胎移植胚胎移植技術(shù)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】限制酶和DNA連接酶；PCR；兩；顯微注射法；G418；正確整合；早期胚胎培養(yǎng)；胚胎移植
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：1難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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