氫能是潛力巨大的可再生清潔能源。利用產(chǎn)氣腸桿菌制氫具有條件溫和、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。E.as菌是產(chǎn)氫率較高的菌種，為進(jìn)一步提高其產(chǎn)氫率，科研人員開(kāi)展了相關(guān)研究。
回答下列問(wèn)題：
（1）為獲得E.as菌純系，可采用

平板劃線（或稀釋涂布平板）

平板劃線（或稀釋涂布平板）

法進(jìn)行純培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中，設(shè)置未接種的平板作為對(duì)照。這樣做的目的是

檢測(cè)培養(yǎng)過(guò)程中是否被雜菌污染

檢測(cè)培養(yǎng)過(guò)程中是否被雜菌污染

。
（2）E.as菌是兼性厭氧菌，為研究呼吸方式是否會(huì)對(duì)其產(chǎn)氫率造成影響，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探究（ 寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)思路） 

取甲、乙兩組等量的葡萄糖培養(yǎng)液，接種等量的E.as菌；甲組控制為無(wú)氧、乙組通入氧氣；分別在適宜且相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，測(cè)定產(chǎn)氫率。

取甲、乙兩組等量的葡萄糖培養(yǎng)液，接種等量的E.as菌；甲組控制為無(wú)氧、乙組通入氧氣；分別在適宜且相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，測(cè)定產(chǎn)氫率。

。
（3）E.as菌細(xì)胞中hycA基因表達(dá)會(huì)抑制產(chǎn)氫代謝，科研人員通過(guò)同源重組方式滅活hycA蛋白，獲得了產(chǎn)氫率更高的工程菌E.as?A，其技術(shù)流程如圖所示。

在過(guò)程Ⅰ中可采用

Ca²⁺轉(zhuǎn)化

Ca²⁺轉(zhuǎn)化

法處理E.as菌，以促進(jìn)DNA片段P的導(dǎo)入。在過(guò)程Ⅱ中，同源重組導(dǎo)致hycA蛋白滅活，其原因是

DNA片段P插入hycA基因，使之發(fā)生基因突變而不能表達(dá)

DNA片段P插入hycA基因，使之發(fā)生基因突變而不能表達(dá)

。依據(jù)基因工程的原理，采取其他手段也可達(dá)到同樣的滅活效果，可采用的其他手段有

基因敲除

基因敲除

（ 寫(xiě)出1項(xiàng)即可）。過(guò)程Ⅲ應(yīng)將菌種接種含有

卡那霉素（和氯霉素）

卡那霉素（和氯霉素）

的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，最終獲得E.as?A工程菌。