如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程示意圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源，此時AOX1基因受到誘導而表達，圖中pPIC9K質粒上片段5'AOX1和片段3'AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子。該酵母菌體內(nèi)無天然質粒，科學家改造出了圖1所示質粒用作載體，其與目的基因形成的重組質粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達。請回答下列問題：
注：
①限制酶識別序列SnaBⅠ：TAC↓GTA，AvrⅡ：C↓CTAG，SacⅠ：GAGCT↓C，BglⅡ：A↓GATCT。
②HBsAg基因中的白色箭頭表示基因轉錄的方向
（1）用PCR技術擴增HBsAg基因時，所用的原料是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸，所用的Taq酶需要 Mg2+Mg2+激活。
（2）為實現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質粒重組，設計引物時需要在引物的 5’5’端添加相應限制酶的識別序列，則在HBsAg基因兩側的A和B位置添加的堿基序列分別是 TACGTATACGTA、CCTAGGCCTAGG，這樣設計的優(yōu)點是 避免目的基因反向接入質粒避免目的基因反向接入質粒。
（3）酶切獲取HBsAg基因后，需用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶（填“EcoliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）將其連接到pPIC9K質粒上，形成重組質粒，構建重組質粒的目的是 讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。
（4）圖1中的pPIC9K質粒若用限制酶SnaBI、BglII聯(lián)合酶切，獲得的DNA片段的長度分別是38kb、27kb、67kb,若用限制酶BglⅡ、AvrⅡ聯(lián)合酶切，得到的DNA片段的長度分別是38kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因長度是55kb。步驟3中應選用限制酶 BglIIBglII來切割重組質粒以獲得重組DNA，切割后的重組DNA的長度是 136 kb136 kb。
（5）轉化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入甲醇，其目的是 誘導HBsAg基因表達誘導HBsAg基因表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸；Mg2+；5’；TACGTA；CCTAGG；避免目的基因反向接入質粒；T4DNA連接酶；讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用；BglII；136 kb；誘導HBsAg基因表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：7引用：1難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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