乳酸菌是乳酸的傳統(tǒng)生產(chǎn)菌，但耐酸能力較差，影響產(chǎn)量。釀酒酵母耐酸能力較強(qiáng)，但不產(chǎn)生乳酸。研究者將乳酸菌的乳酸脫氫酶基因（LDH）導(dǎo)入釀酒酵母，獲得能產(chǎn)生乳酸的工程菌株。如圖1為乳酸和乙醇發(fā)酵途徑示意圖，圖2為構(gòu)建表達(dá)載體時所需的關(guān)鍵條件。

（1）乳酸脫氫酶在轉(zhuǎn)基因釀酒酵母中參與厭氧發(fā)酵的場所應(yīng)為

細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)

細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)

。
（2）獲得轉(zhuǎn)基因釀酒酵母菌株的過程如下：
①設(shè)計引物擴(kuò)增乳酸脫氫酶編碼序列。
為使擴(kuò)增出的序列中編碼起始密碼子的序列由原核生物偏好的GTG轉(zhuǎn)變?yōu)檎婧松锲玫腁TG，且能通過雙酶切以正確方向插入質(zhì)粒，需設(shè)計引物1和2。其中引物1的5′端序列應(yīng)考慮

包含BamHI的識別序列

包含BamHI的識別序列

和

將GTG改為ATG

將GTG改為ATG

。
②將上述PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒重組后，導(dǎo)入大腸桿菌，篩選、鑒定，擴(kuò)增重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒上有

原核生物復(fù)制原點(diǎn)

原核生物復(fù)制原點(diǎn)

，所以能在大腸桿菌中擴(kuò)增。啟動子存在物種特異性，易被本物種的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)識別并啟動轉(zhuǎn)錄，因此重組質(zhì)粒上的乳酸脫氫酶編碼序列

不能

不能

（能/不能）在大腸桿菌中高效表達(dá)。
③提取重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入不能合成尿嘧啶的釀酒酵母菌株，在

缺失尿嘧啶

缺失尿嘧啶

的固體培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)基因釀酒酵母，并進(jìn)行鑒定。
（3）以葡萄糖為碳源，利用該轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進(jìn)行厭氧發(fā)酵，結(jié)果既產(chǎn)生乳酸，也產(chǎn)生乙醇。若想進(jìn)一步提高其乳酸產(chǎn)量，下列措施中不合理的是

B

B

（單選）。
A.進(jìn)一步優(yōu)化發(fā)酵條件
B.使用乳酸菌LDH基因自身的啟動子
C.敲除釀酒酵母的丙酮酸脫羧酶基因
D.對轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進(jìn)行誘變育種