pUC質粒載體如圖所示，目的基因插入到Amp′或LacZ′中均會導致相應基因失活。篩選含有重組質粒的大腸桿菌可采用藍白斑法，機制如下：LacZ′基因在IPTG誘導下表達的α-肽可與大腸桿菌自身編碼的β-肽互補從而產(chǎn)生有活性的β-半乳糖苷酶，該酶能夠水解X-gal使菌落呈藍色，否則呈白色。某科研人員利用LacZ′基因與目的基因構建基因表達載體A后再轉化大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}：
說明：1.Amp′表示氨芐青霉素抗性基因
LacZ′基因表示β-半乳糖苷酶基因部分DNA序列；
2.SmaI與MstI識別序列和切割位點不同
（1）1967年科學家發(fā)現(xiàn)質粒能自我復制，并可以在細菌細胞間轉移，這一發(fā)現(xiàn)為基因轉移基因轉移找到了一種運載工具。
（2）目的基因主要是指編碼蛋白質的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用調(diào)控作用的因子。若需快速得到大量目的基因，可采用PCR技術，該技術一般由變性→復性（退火）→延伸變性→復性（退火）→延伸三個基本反應步驟構成。
（3）作為基因表達載體除了需要有復制原點、標記基因、目的基因外，還需要具有啟動子和終止子啟動子和終止子。為了避免目的基因的自身環(huán)化，寫出構建基因表達載體A的主要實驗步驟：用MstI和BgII雙酶切pUC質粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應用MstI和BgII雙酶切pUC質粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應。
（4）轉化后的大腸桿菌需放在含有氨芐青霉素、IPTG和X-galIPTG和X-gal的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，篩選出白色的菌落即為含有重組質粒（基因表達載體A）重組質粒（基因表達載體A）的大腸桿菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因轉移；調(diào)控作用；變性→復性（退火）→延伸；啟動子和終止子；用MstI和BgII雙酶切pUC質粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應；IPTG和X-gal；重組質粒（基因表達載體A）
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：1難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
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