pUC質(zhì)粒載體如圖所示，目的基因插入到Amp′或LacZ′中均會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)基因失活。篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌可采用藍(lán)白斑法，機(jī)制如下：LacZ′基因在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)的α-肽可與大腸桿菌自身編碼的β-肽互補(bǔ)從而產(chǎn)生有活性的β-半乳糖苷酶，該酶能夠水解X-gal使菌落呈藍(lán)色，否則呈白色。某科研人員利用LacZ′基因與目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體A后再轉(zhuǎn)化大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}：
說明：1.Amp′表示氨芐青霉素抗性基因
LacZ′基因表示β-半乳糖苷酶基因部分DNA序列；
2.SmaI與MstI識(shí)別序列和切割位點(diǎn)不同
（1）1967年科學(xué)家發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒能自我復(fù)制，并可以在細(xì)菌細(xì)胞間轉(zhuǎn)移，這一發(fā)現(xiàn)為基因轉(zhuǎn)移基因轉(zhuǎn)移找到了一種運(yùn)載工具。
（2）目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用調(diào)控作用的因子。若需快速得到大量目的基因，可采用PCR技術(shù)，該技術(shù)一般由變性→復(fù)性（退火）→延伸變性→復(fù)性（退火）→延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。
（3）作為基因表達(dá)載體除了需要有復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因、目的基因外，還需要具有啟動(dòng)子和終止子啟動(dòng)子和終止子。為了避免目的基因的自身環(huán)化，寫出構(gòu)建基因表達(dá)載體A的主要實(shí)驗(yàn)步驟：用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)。
（4）轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需放在含有氨芐青霉素、IPTG和X-galIPTG和X-gal的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出白色的菌落即為含有重組質(zhì)粒（基因表達(dá)載體A）重組質(zhì)粒（基因表達(dá)載體A）的大腸桿菌。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因轉(zhuǎn)移；調(diào)控作用；變性→復(fù)性（退火）→延伸；啟動(dòng)子和終止子；用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)；IPTG和X-gal；重組質(zhì)粒（基因表達(dá)載體A）
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：1難度：0.6
相似題
-
1．金茶花是中國(guó)特有的觀賞品種，但易得枯萎病?？茖W(xué)家在某種植物中找到了抗枯萎病的基因，通過如圖所示的方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品種。相關(guān)敘述不正確的是（ ?。?/h2>發(fā)布：2024/12/31 3:0:2組卷：6引用：2難度：0.7 -
2．Golden Gate是當(dāng)代極為重要的一種分子克隆技術(shù)，該技術(shù)的實(shí)施依賴于Ⅱs型限制酶，如圖所示為某種Ⅱs型限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)（N表示任意堿基），以下說法正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:0:2組卷：50引用：3難度：0.7 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
把好題分享給你的好友吧~~