研究發(fā)現(xiàn)，Ti質(zhì)粒上的 vir 區(qū)對T-DNA的轉(zhuǎn)移是必不可少的，但不一定與T-DNA連在一起。根據(jù)這一原理，研究人員開發(fā)了雙元載體系統(tǒng)，包括微型 Ti質(zhì)粒和輔助 Ti質(zhì)粒（如圖）。利用雙元質(zhì)粒，研究人員將抗草甘膦基因 cp4-epsps 導(dǎo)入大豆中，培育出抗除草劑（草甘膦）轉(zhuǎn)基因大豆。cp4-epsps 基因來源于細(xì)菌，其表達(dá)產(chǎn)物需引導(dǎo)至葉綠體中才能起作用，回答下列問題：

（1）為將cp4-epsps基因?qū)氪蠖辜?xì)胞的葉綠體，將其與葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因ctp融合，構(gòu)建融合基因（下稱cc 基因）。構(gòu)建融合基因時(shí)需要的酶是

限制酶、DNA連接酶

限制酶、DNA連接酶

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（2）微型Ti質(zhì)粒和輔助Ti質(zhì)粒均比野生 Ti質(zhì)粒小得多，優(yōu)點(diǎn)是

質(zhì)粒小，易于轉(zhuǎn)化（提高質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率）

質(zhì)粒小，易于轉(zhuǎn)化（提高質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率）

。微型Ti質(zhì)粒和輔助Ti質(zhì)粒均刪除了生長素基因和細(xì)胞分裂素基因，這兩個(gè)基因轉(zhuǎn)染到水稻愈傷組織后不利于水稻愈傷組織的再分化，原因是

T-DNA中生長素基因和細(xì)胞分裂素基因在愈傷組織中表達(dá)，所產(chǎn)生的激素會(huì)影響愈傷組織的分化

T-DNA中生長素基因和細(xì)胞分裂素基因在愈傷組織中表達(dá)，所產(chǎn)生的激素會(huì)影響愈傷組織的分化

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（3）構(gòu)建cc基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)將 cc 基因?qū)?

微型Ti質(zhì)粒

微型Ti質(zhì)粒

（填“微型 Ti質(zhì)?！盎颉拜o助 Ti質(zhì)?！埃?；并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中；轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌與含有另一種質(zhì)粒的農(nóng)桿菌混合，經(jīng)溫育得到含雙元載體的農(nóng)桿菌。對轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌進(jìn)行篩選時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)加入

卡那霉素

卡那霉素

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（4）在對轉(zhuǎn)cp4-epsps 水稻進(jìn)行檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)葉肉細(xì)胞內(nèi)有epsps蛋白，但水稻卻無草甘膦抗性，原因可能是

葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽異常，不能引導(dǎo)epsps蛋白進(jìn)入葉綠體

葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽異常，不能引導(dǎo)epsps蛋白進(jìn)入葉綠體

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