人胰島素基因表達(dá)的最初產(chǎn)物是一條肽鏈構(gòu)成的前胰島素原，經(jīng)加工后形成兩條肽鏈（A鏈和B鏈）的有生物活性的胰島素。此后科學(xué)家又提出了利用基因工程改造大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素的兩種方法：“AB”法是根據(jù)胰島素A、B兩條肽鏈的氨基酸序列人工合成兩種DNA片段，利用工程菌分別合成兩條肽鏈后將其混合自然形成胰島素；“BCA”法是利用人體某細(xì)胞中的mRNA得到胰島素基因，表達(dá)出胰島素原后再用特定酶切掉C肽段。這兩種方法使用同一種質(zhì)粒作為載體。請(qǐng)據(jù)圖分析并回答下列問(wèn)題：

（1）“AB”法中人工合成的兩種DNA片段均有多種可能的序列，原因是

一種氨基酸可能對(duì)應(yīng)多種密碼子

一種氨基酸可能對(duì)應(yīng)多種密碼子

?！癇CA”法是利用人體

胰島B

胰島B

細(xì)胞中的mRNA，再由mRNA經(jīng)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

得到的胰島素基因，

“AB和BCA”

“AB和BCA”

（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法獲取的目的基因中不含人胰島素基因啟動(dòng)子。
（2）如圖是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素過(guò)程中使用的質(zhì)粒及目的基因的部分結(jié)構(gòu)。為使目的基因與載體正確連接，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)可將限制酶

XhoⅠ和MunⅠ

XhoⅠ和MunⅠ

的識(shí)別序列添加在PCR兩種引物的

5′

5′

（填“3′”或“5′”）端，PCR開(kāi)始后，與a鏈相結(jié)合的引物上添加的是限制酶

MunⅠ

MunⅠ

的識(shí)別序列。若計(jì)劃用1個(gè)胰島素基因?yàn)槟０瀚@得m（m大于2）個(gè)胰島素基因，則消耗的引物總量是

2^m-2

2^m-2

個(gè)。
（3）β-半乳糖苷酶可以分解無(wú)色的X-gal產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落為白色。經(jīng)鈣離子處理大腸桿菌后，與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)一段時(shí)間，將大腸桿菌接種到添加了

氨芐青霉素和X-gal

氨芐青霉素和X-gal

的培養(yǎng)基上篩選出

白

白

色的菌落即為工程菌種。
（4）科學(xué)家利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)，研制出了易吸收、起效快的賴(lài)脯胰島素，獲得賴(lài)脯胰島素基因的途徑是：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→

設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)

設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)

→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。