新冠病毒S蛋白與其侵染宿主細胞密切相關(guān),疫苗的研究與生產(chǎn)有多種途徑,回答以下問題。
(1)我國目前已上市的滅活新冠疫苗,是利用Vero細胞(非洲綠猴的腎臟上皮細胞)對病毒進行增殖后滅活,因此需對Vero細胞進行大量培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)時需利用胰蛋白酶使細胞分散開并制成 細胞懸浮液細胞懸浮液。對病毒非滅活是指利用物理或化學(xué)手段使病原體失去感染能力,但保留原來的 抗原抗原結(jié)構(gòu)。
(2)S蛋白的RBD多肽區(qū)域是新冠病毒感染宿主細胞的關(guān)鍵。研究人員現(xiàn)利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)S蛋白的RBD多肽片段制作重組蛋白疫苗?;具^程如圖所示:
(注:LacZ基因可使細菌利用加入培養(yǎng)基的物質(zhì)X-gal,從而使菌落顯現(xiàn)出藍色。若無該基因或該基因被破壞,則菌落成白色。)
①提取新冠病毒RNA經(jīng)過 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA,經(jīng) PCRPCR技術(shù)擴增得到RBD基因,與克隆質(zhì)粒pUC質(zhì)粒連接,并接種到添加 氨芐青霉素和X-gal氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng),一段時間后,挑選顏色為 白色白色的菌落用液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng),提取重組質(zhì)粒pUC-RBD。
②接下來應(yīng)用限制酶對pUC-RBD進行酶切獲得RBD基因,并與BamHI酶和XhoI酶切后的載體pET質(zhì)粒連接。但RBD基因序列兩端無相應(yīng)限制酶酶切位點,現(xiàn)欲利用RCR技術(shù)對RBD基因進行擴增同時在其上下游區(qū)域增補上相應(yīng)限制酶的識別序列,則根據(jù)如表,PCR時所用的上下游引物應(yīng)分別添加的序列是 5’-GGATCC-3’和5’CTCGAG-3’5’-GGATCC-3’和5’CTCGAG-3’。
限制酶 | BamHⅠ | HindⅢ | XhoⅠ | XbaⅠ |
識別序列 | 5′-GGATCC-3′ | 5′-AAGCTT-3′ | 5′-CTCGAG-3′ | 5′-TCTAGA-3′ |
RBD抗體
RBD抗體
進行檢測。(3)有研究表明,現(xiàn)有的疫苗對新出現(xiàn)的變異類型病毒仍具有預(yù)防效果,原因是
與原有新冠病毒的抗原結(jié)構(gòu)相似
與原有新冠病毒的抗原結(jié)構(gòu)相似
。【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】細胞懸浮液;抗原;逆轉(zhuǎn)錄;PCR;氨芐青霉素和X-gal;白色;5’-GGATCC-3’和5’CTCGAG-3’;RBD抗體;與原有新冠病毒的抗原結(jié)構(gòu)相似
【解答】
【點評】
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