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下面是某研究小組開展的“豬血漿白蛋白的提取及相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定”研究,請(qǐng)協(xié)助完成有關(guān)問題:
材料儀器:新鮮豬血、低速冷凍離心機(jī)、透析袋、電泳儀等。
化學(xué)試劑:pH為7.4的緩沖液、檸檬酸鈉,奈氏試劑(與
NH
+
4
反應(yīng)出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀)、飽和(NH42SO4溶液、生理鹽水等。
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)樣品獲?。合蛐迈r豬血中加入
(適量的)檸檬酸鈉
(適量的)檸檬酸鈉
,靜置一段時(shí)間后取上層血漿。
(2)鹽析法粗提蛋白質(zhì):
①向血漿中加入一定體積的飽和(NH42SO4溶液,使(NH42SO4的濃度達(dá)到50%,充分混合后靜置、離心,取沉淀物。
②向沉淀物中加入適量生理鹽水使之溶解,再向其中加入一定體積的飽和(NH42SO4溶液,使(NH42SO4的濃度達(dá)到33%,充分混合后靜置、離心,取沉淀物。
③重復(fù)步驟①②2~3次,最后用生理鹽水將沉淀溶解,即得粗提品。
鹽析粗提血漿白蛋白的主要原因是
該血漿白蛋白在50%和33%的(NH42SO4溶液中的溶解度低
該血漿白蛋白在50%和33%的(NH42SO4溶液中的溶解度低
,重復(fù)步驟①②的主要目的是
除去更多的雜蛋白
除去更多的雜蛋白
。
(3)透析除鹽:將粗提品裝入透析袋,以pH為7.4的緩沖液作透析液。每隔4h更換一次透析液,每次更換前利用奈氏試劑檢測(cè)透析液中
NH
+
4
的量。利用緩沖液作透析液的目的是
防止pH變化對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響
防止pH變化對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響
。檢測(cè)中,若觀察到透析液中
不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀
不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀
時(shí),即可終止透析。
(4)凝膠色譜法分離:透析后的樣品經(jīng)凝膠柱洗脫,獲得純凈血漿白蛋白樣品。
(5)蛋白質(zhì)鑒定:化學(xué)物質(zhì)SDS能使蛋白質(zhì)變性,解聚成單條肽鏈。在聚丙烯酰胺凝膠電泳中加入一定量的SDS,電泳遷移率完全取決于肽鏈的分子大小。如圖所示為本實(shí)驗(yàn)中用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血漿白蛋白的結(jié)果。根據(jù)電泳結(jié)果,某同學(xué)得出“提取的血漿白蛋白含有兩條肽鏈”的結(jié)論,這種說法
不可靠
不可靠
(填“可靠”或“不可靠”),理由是
只能得出提取的血漿白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈,但不一定是兩條
只能得出提取的血漿白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈,但不一定是兩條
。

【答案】(適量的)檸檬酸鈉;該血漿白蛋白在50%和33%的(NH42SO4溶液中的溶解度低;除去更多的雜蛋白;防止pH變化對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響;不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀;不可靠;只能得出提取的血漿白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈,但不一定是兩條
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/5/17 8:0:8組卷:14引用:1難度:0.5
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