乙烯具有促進(jìn)果實(shí)成熟的作用，ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個(gè)關(guān)鍵酶。利用反義DNA技術(shù)（原理如圖1），可以抑制這兩個(gè)基因的表達(dá)，從而使番茄具有耐儲(chǔ)存、宜運(yùn)輸?shù)膬?yōu)點(diǎn)，如圖2為融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反義表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)示意圖。

（1）圖2中的2A11為特異性啟動(dòng)子，則該2A11應(yīng)在番茄的

果實(shí)

果實(shí)

 （器官）中啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。
（2）從番茄成熟果實(shí)中提取

RNA

RNA

 為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進(jìn)行拼接構(gòu)成融合基因。
（3）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位點(diǎn)，ACC合成酶基因兩端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位點(diǎn)，用限制酶

XbaⅠ

XbaⅠ

 對(duì)上述兩個(gè)基因進(jìn)行酶切，再串聯(lián)成融合基因，相應(yīng)的Ti質(zhì)粒應(yīng)用限制酶

BamHⅠ和SacⅠ

BamHⅠ和SacⅠ

 進(jìn)行切割，確保融合基因能夠插入載體中。
（4）為了實(shí)現(xiàn)圖1中反義基因的效果，應(yīng)將融合基因

反向

反向

 （正向/反向）插入在啟動(dòng)子2A11的下游即可構(gòu)成反義融合基因。將圖中表達(dá)載體與農(nóng)桿菌菌液混合后，接種在含有

卡那霉素

卡那霉素

 的培養(yǎng)基中，可篩選出含有反義融合基因的農(nóng)桿菌，再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因番茄。
（5）在檢測(cè)番茄細(xì)胞中是否存在反義融合基因時(shí)，

不能

不能

（填“能”/“不能”）用放射性物質(zhì)標(biāo)記的ACC氧化（合成）酶基因片段做探針進(jìn)行檢測(cè)，理由是

番茄細(xì)胞內(nèi)本來就存在ACC氧化（合成）酶基因

番茄細(xì)胞內(nèi)本來就存在ACC氧化（合成）酶基因

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