DDX5基因在細胞周期調(diào)控、腫瘤發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用。研究人員運用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)對口蹄疫病毒易感的PK-15細胞株中的DDX5基因進行敲除，為后續(xù)研究DDX5基因在病毒感染中的作用提供基礎(chǔ)。請據(jù)圖回答下列問題。
（1）圖1中，Ori是 解旋酶（DNA聚合酶）解旋酶（DNA聚合酶）（酶）首先結(jié)合的核苷酸序列。構(gòu)建CRISPR-Cas9表達載體時使用的工具酶主要有 限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶。結(jié)合對圖2中CRISPR-Cas9技術(shù)原理的理解，圖1表達載體中需要插入兩種sgRNA基因，原因是 敲除DDX5基因內(nèi)部一段堿基時需要有2個切點敲除DDX5基因內(nèi)部一段堿基時需要有2個切點。
（2）研究中先將CRISPR-Cas9表達載體導(dǎo)入大腸桿菌DH5a,再將菌液利用 （稀釋）涂布平板（稀釋）涂布平板法接種到加有 氨芐青霉素氨芐青霉素的細菌培養(yǎng)基上，待菌落長成后，直接挑取菌落加入到PCR反應(yīng)系統(tǒng)中進行基因鑒定。PCR過程中不需要先提取細菌DNA的原因是 細菌DNA是裸露的可以直接作為PCR模板；PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌釋放DNA細菌DNA是裸露的可以直接作為PCR模板；PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌釋放DNA。
（3）研究中采用培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌對CRISPR.Cas9表達載體進行擴增。與PCR相比，利用大腸桿菌進行目的基因擴增的優(yōu)點有 細胞內(nèi)擴增不易發(fā)生突變；細菌培養(yǎng)操作簡單；CRISPR-Cas9表達載體比較大，利用PCR獲得目標(biāo)產(chǎn)物幾率小；表達載體在細胞中能穩(wěn)定保存且取用方便細胞內(nèi)擴增不易發(fā)生突變；細菌培養(yǎng)操作簡單；CRISPR-Cas9表達載體比較大，利用PCR獲得目標(biāo)產(chǎn)物幾率??；表達載體在細胞中能穩(wěn)定保存且取用方便。
（4）取轉(zhuǎn)化的PK15細胞懸液進行有限稀釋，再接種到6孔培養(yǎng)板上，一段時間后對各孔內(nèi)的細胞株進行DDX5蛋白檢測，結(jié)果如圖3（其中B-actin是真核細胞骨架蛋白）。對細胞懸液有限稀釋法的目的是 保證每孔中最多接種一個細胞，以獲得單克隆細胞株保證每孔中最多接種一個細胞，以獲得單克隆細胞株，細胞培養(yǎng)時CO2培養(yǎng)箱中充入的氣體應(yīng)是 95%的空氣和5%CO295%的空氣和5%CO2。根據(jù)檢測結(jié)果，敲除DDX5基因的細胞株編號有 1和51和5。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】解旋酶（DNA聚合酶）；限制酶、DNA連接酶；敲除DDX5基因內(nèi)部一段堿基時需要有2個切點；（稀釋）涂布平板；氨芐青霉素；細菌DNA是裸露的可以直接作為PCR模板；PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌釋放DNA；細胞內(nèi)擴增不易發(fā)生突變；細菌培養(yǎng)操作簡單；CRISPR-Cas9表達載體比較大，利用PCR獲得目標(biāo)產(chǎn)物幾率??；表達載體在細胞中能穩(wěn)定保存且取用方便；保證每孔中最多接種一個細胞，以獲得單克隆細胞株；95%的空氣和5%CO2；1和5
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：2難度：0.4
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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