Anti基因是小型豬器官表面抗原基因，人工合成的reAnti基因的模板鏈與Anti基因的模板鏈互補(bǔ)?？茖W(xué)家利用合成的reAnti基因培育出轉(zhuǎn)基因克隆豬，用于解決人類器官移植時(shí)免疫排斥。
（1）利用PCR技術(shù)對(duì)reAnti基因進(jìn)行擴(kuò)增，其原理是

DNA雙鏈復(fù)制

DNA雙鏈復(fù)制

，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用兩種不同的限制酶切割reAnti基因和運(yùn)載體DNA來獲得不同的黏性末端，原因是

防止目的基因和運(yùn)載體DNA自身環(huán)化和反向連接（使目的基因定向連接到運(yùn)載體上）

防止目的基因和運(yùn)載體DNA自身環(huán)化和反向連接（使目的基因定向連接到運(yùn)載體上）

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（2）豬胎兒成纖維細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需要用

胰蛋白酶（膠原蛋白酶）

胰蛋白酶（膠原蛋白酶）

酶將組織分散成細(xì)胞懸液。培育轉(zhuǎn)基因豬時(shí)，應(yīng)使用

顯微注射

顯微注射

技術(shù)將含有reAnti基因的表達(dá)載體導(dǎo)入豬成纖維細(xì)胞。再將該轉(zhuǎn)基因豬的細(xì)胞核注入

減數(shù)第二次分裂中期

減數(shù)第二次分裂中期

時(shí)期的卵母細(xì)胞中，構(gòu)建重組胚胎。
（3）胚胎培養(yǎng)液中除了一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外，還需要添加“兩酸、兩素”以及動(dòng)物血清，其中的“兩酸”是指

氨基酸和核苷酸

氨基酸和核苷酸

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（4）用

DNA分子雜交

DNA分子雜交

技術(shù)檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因克隆豬的細(xì)胞核DNA中含有reAnti基因，但器官表面不含有抗原，原因是

reAnti基因抑制了Anti基因的翻譯過程，不能合成相應(yīng)的抗原（reAnti基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA與Anti基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成了雙鏈，不能翻譯合成相應(yīng)的抗原）

reAnti基因抑制了Anti基因的翻譯過程，不能合成相應(yīng)的抗原（reAnti基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA與Anti基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成了雙鏈，不能翻譯合成相應(yīng)的抗原）

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