CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術(shù),Cas9基因表達(dá)的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”,在單鏈向?qū)NA(SgRNA)引導(dǎo)下,切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的工作原理如圖所示。
回答下列問(wèn)題。
(1)過(guò)程①中,為構(gòu)建CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒,需對(duì)含有特定sgRNA編碼序列的DNA進(jìn)行酶切處理后,將其插入到經(jīng)相同酶切處理過(guò)的質(zhì)粒上,插入時(shí)所需要的酶是 DNA連接酶DNA連接酶,切合和插入所用的限制酶種類一般應(yīng)相同,原因是 為了便于質(zhì)粒和目的基因連接為了便于質(zhì)粒和目的基因連接。
(2)過(guò)程②中,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞的方法是 感受態(tài)細(xì)胞法/Ca2+處理法感受態(tài)細(xì)胞法/Ca2+處理法。
(3)過(guò)程③~⑤中,SgRNA與Cas9蛋白形成復(fù)合體,該復(fù)合體中的SgRNA可識(shí)別并與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合,二者結(jié)合的原理是 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)。隨后,Cas9蛋白可切割 目標(biāo)基因目標(biāo)基因序列。
(4)利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除某DNA片段(記為甲)中長(zhǎng)度為1200bp的基因(記為乙),在DNA水平上判斷基因敲除是否成功所采用的方法是 DNA分子雜交DNA分子雜交,大致過(guò)程及成功敲除的判斷依據(jù)是 用乙制作的探針與甲雜交,若無(wú)雜交帶,則敲除成功用乙制作的探針與甲雜交,若無(wú)雜交帶,則敲除成功。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】DNA連接酶;為了便于質(zhì)粒和目的基因連接;感受態(tài)細(xì)胞法/Ca2+處理法;堿基互補(bǔ)配對(duì);目標(biāo)基因;DNA分子雜交;用乙制作的探針與甲雜交,若無(wú)雜交帶,則敲除成功
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:5引用:1難度:0.5
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