草甘膦是一種非選擇性除草劑，殺死雜草的同時也殺死農(nóng)作物。它與植物體內(nèi)的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）結(jié)構(gòu)相似，可與PEP競爭結(jié)合EPSP合酶，阻止PEP轉(zhuǎn)化，影響植物細(xì)胞正常代謝。我國科學(xué)家從草甘膦施用土壤中的微生物體內(nèi)獲取草甘膦抗性基因GR29，并將其導(dǎo)入大豆體細(xì)胞中獲得抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因大豆。
（1）結(jié)合上述信息推測GR29發(fā)揮抗草甘膦作用的途徑可能是GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競爭結(jié)合EPSP合酶GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競爭結(jié)合EPSP合酶。
（2）將GR29導(dǎo)入大豆細(xì)胞前，需將其與酶切后的質(zhì)粒P連接獲得重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒。因GR29基因序列兩端無所需的限制酶切位點，據(jù)圖1推測擴(kuò)增該基因時需向引物1和引物2的5'端5'端（5'端/3'端）加上PstI和XhoIPstI和XhoI限制酶的識別序列。
（3）熒光定量PCR技術(shù)可實現(xiàn)對轉(zhuǎn)基因大豆中目的基因的定量檢測。在PCR反應(yīng)體系中，加入的熒光探針與模板DNA（目的基因）的某條鏈互補(bǔ)結(jié)合，當(dāng)合成的子鏈延伸至探針處，探針被酶切降解，熒光監(jiān)測系統(tǒng)就會接收到熒光信號，具體原理如圖2所示。
①可通過檢測熒光熒光判定待測植物中是否含有模板DNA，且熒光達(dá)到某一特定強(qiáng)度所需的循環(huán)次數(shù)越少少，模板DNA含量越高。
②通過上述技術(shù)定量檢測目的基因，需從設(shè)計的多對引物和多種探針中選擇特異性最好的組合，為此需進(jìn)行多組實驗，每個實驗組需向反應(yīng)體系中加入a、d、e、f、ha、d、e、f、h。（填字母）
a.轉(zhuǎn)基因大豆的DNA模板
b.非轉(zhuǎn)基因大豆DNA模板
c.足量的待測引物
d.定量的待測引物
e.定量的待測熒光探針
f.熱穩(wěn)定DNA聚合酶
g.解旋酶
h.足量的脫氧核苷酸（dNTP）
③預(yù)期隨時間變化，熒光強(qiáng)度達(dá)到一定值后將不再增加，這是由于DNA復(fù)制為半保留復(fù)制DNA復(fù)制為半保留復(fù)制。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競爭結(jié)合EPSP合酶；重組質(zhì)粒；5'端；PstI和XhoI；熒光；少；a、d、e、f、h；DNA復(fù)制為半保留復(fù)制
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：98引用：3難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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