黃萎病是危害棉花種植的常見疾病，科學(xué)家通過基因工程技術(shù)將抗黃萎病基因--葡萄糖氧化酶基因（GO）導(dǎo)入棉花，獲得抗黃萎病棉花。已知T-DNA上的基因在農(nóng)桿菌中不表達(dá)，在植物細(xì)胞中可以表達(dá)，請(qǐng)將轉(zhuǎn)基因棉花培育步驟補(bǔ)充完整：
（1）構(gòu)建如圖所示重組Ti質(zhì)粒，用 CaCl2CaCl2處理農(nóng)桿菌，使重組Ti質(zhì)粒進(jìn)入農(nóng)桿菌中，將農(nóng)桿菌接種到含 抗卡那霉素抗卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)適宜時(shí)間后，離心，去除上清液，加入適量MS液體培養(yǎng)基，可通過測(cè)定菌液在600nm波長處的 光密度值光密度值來確定農(nóng)桿菌密度是否適宜。
（2）切取經(jīng) 無菌無菌培養(yǎng)的棉花幼苗的下胚軸，直接轉(zhuǎn)入菌液中侵染5-10min后，倒出菌液，用滅菌濾紙吸取下胚軸表面多余菌液，將下胚軸放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天。2天后，向培養(yǎng)基中加入適量 草丁膦草丁膦和青霉素，其目的是篩選出轉(zhuǎn)化成功的棉花細(xì)胞和 抑制農(nóng)桿菌的生長抑制農(nóng)桿菌的生長。
（3）將所得愈傷組織接種到適宜培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)形成胚狀體，在適宜人工條件下繼續(xù)發(fā)育成棉花幼苗。利用 抗原抗體分子雜交技術(shù)抗原抗體分子雜交技術(shù)技術(shù)檢測(cè)棉花細(xì)胞是否合成葡萄糖氧化酶，選出抗黃萎病棉花。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】CaCl2；抗卡那霉素；光密度值；無菌；草丁膦；抑制農(nóng)桿菌的生長；抗原抗體分子雜交技術(shù)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：38引用：3難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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