人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點，neor為新霉素抗性基因，BLC基因為β-乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答：
（1）過程①的基本原理是先以人乳腺細胞總RNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNAcDNA，再通過PCR技術(shù)擴增hLF基因。但是過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因為 hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達）hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達），在RT-PCR過程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEBL質(zhì)粒中。
（2）過程③中pEBL質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)進入山羊乳腺上皮細胞依據(jù)的原理是 生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細胞應(yīng)該是導(dǎo)入了 pEB質(zhì)粒或pEBL質(zhì)粒（或普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒）pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒（或普通質(zhì)粒或重組質(zhì)粒）的細胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞，觀察到 無綠色熒光無綠色熒光現(xiàn)象即為轉(zhuǎn)染成功的細胞。
（4）科研過程中，可以用PCR技術(shù)檢測受體細胞中的染色體DNA上是否插入了hLF基因或檢測 hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNAhLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，還可以用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術(shù)，檢測hLF基因是否翻譯出人乳鐵蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA；hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達）；5'；SalⅠ和BamHⅠ；生物膜具有一定的流動性；pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒（或普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒）；無綠色熒光；hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA；抗原-抗體雜交
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：1難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識別序列及切割位點，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點?，F(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是（ ?。?
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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