為了提高菊花抗凍能力，研究者從其他生物中克隆出抗凍基因C（圖1），擬將其與質(zhì)粒（圖2）重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。

回答下列問題：
（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要用到的工具酶為

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶（限制酶和DNA連接酶）

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶（限制酶和DNA連接酶）

。為使抗凍基因C在菊花細(xì)胞中高效表達(dá)，依據(jù)圖2需要把目的基因片段插入表達(dá)載體的

啟動(dòng)子a

啟動(dòng)子a

和

終止子a

終止子a

之間。
（2）若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過質(zhì)粒作為載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是

目的基因無復(fù)制原點(diǎn)（目的基因無表達(dá)所需的啟動(dòng)子等）

目的基因無復(fù)制原點(diǎn)（目的基因無表達(dá)所需的啟動(dòng)子等）

（答出一點(diǎn)即可）。若想了解抗凍基因C是否整合到菊花染色體上，檢測方法是采用

DNA分子雜交

DNA分子雜交

技術(shù)。
（3）科研工作者可以利用

PCR技術(shù)

PCR技術(shù)

獲得更多的抗凍基因C，借助農(nóng)桿菌將重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞，在該過程中需添加酚類物質(zhì)，目的是

吸引農(nóng)桿菌感染菊花細(xì)胞

吸引農(nóng)桿菌感染菊花細(xì)胞

。
（4）若想獲得完整的轉(zhuǎn)基因植株。還需借助

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

技術(shù)。假如獲得的轉(zhuǎn)基因植株（抗凍基因C已經(jīng)整合到菊花的基因組中）抗凍能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是

目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常

目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常

。