幽門螺桿菌是一種常見的人類致病菌，其骨架蛋白MreB通過影響脲酶活性而參與調(diào)控其致病性。為了更準確地分離出MreB蛋白，用重疊延伸PCR技術(shù)（指在PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上，采用具有互補末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成重疊鏈，通過重疊鏈的延伸，將不同來源的片段重疊拼接起來的一項技術(shù)），將幽門螺桿菌MreB基因中編碼終止密碼子前的DNA序列與TAP標簽（可以標記幽門螺桿菌基因組中任何一個基因，且不會影響基因的表達）進行連接，構(gòu)建了融合表達蛋白MreB和TAP標簽的質(zhì)粒，實驗流程如圖所示。據(jù)圖回答下列問題：
（1）重疊PCR獲得帶有標簽的MreB基因。
①獲得兩種具有重疊片段DNA的過程中，PCR1和PCR2必須在不同的反應(yīng)體系中，原因是 引物2和引物3中存在互補配對的片段，置于同一反應(yīng)體系時，它們會發(fā)生結(jié)合而失去作用引物2和引物3中存在互補配對的片段，置于同一反應(yīng)體系時，它們會發(fā)生結(jié)合而失去作用。
②PCR3反應(yīng)體系中所加入的引物是 引物1、引物4引物1、引物4。
（2）重組質(zhì)粒的構(gòu)建。
①為將帶有標簽的MreB基因定向插入到pK18mobsacB質(zhì)粒中，需要在引物末端添加限制酶識別序列，據(jù)圖分析，在引物1添加的序列所對應(yīng)的限制酶是 SmaISmaI，在引物4添加的序列所對應(yīng)的限制酶是XhoIXhoI。經(jīng)過這兩種酶酶切的帶有標簽的MreB基因和pK18mobsacB質(zhì)粒進行連接時，可選用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
②重組質(zhì)粒中，KmR基因的作用是 為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】引物2和引物3中存在互補配對的片段，置于同一反應(yīng)體系時，它們會發(fā)生結(jié)合而失去作用；引物1、引物4；SmaI；XhoI；T4DNA連接酶；為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/10 8:0:9組卷：30引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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