IKK激酶山IKKα、IKKβ和IKKγ三種亞基組成,該酶參與動物體內(nèi)免疫細胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)患兒的IKKβ基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃。為研究該患兒發(fā)病機制,研究人員應用大引物PCR定點誘變技術獲得突變基因,并培育出SCID模型小鼠。圖1為定點誘變獲得突變基因的過程。
(1)在定點誘變獲取突變基因時,PCR1中使用的引物有 引物A、引物C引物A、引物C,PCR中使用的引物有 引物B、大引物b引物B、大引物b。PCR1和PCR2不能在同一個反應體系中進行,原因是 引物之間能結合,會干擾引物和模板鏈的結合,影響PCR過程引物之間能結合,會干擾引物和模板鏈的結合,影響PCR過程。
(2)PCR在第一個循環(huán)之前通常將DNA樣品加熱至95℃數(shù)分鐘進行預變性處理,其目的是 增加大分子模板DNA徹底變性的概率增加大分子模板DNA徹底變性的概率。由于大引物較長,含C與G的堿基較多,為減少非目標基因的獲得,在PCR2復性過程中應采取的措施是 適當提高退火溫度適當提高退火溫度。
(3)培育模型鼠的過程中,需用限制酶SacI、HindⅢ對突變基因和載體進行雙酶切,雙酶切的優(yōu)點是 防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接。研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲得一只轉(zhuǎn)基因雜合鼠HE,讓HE與野生鼠雜交得F1,F(xiàn)1雌雄鼠隨機交配得F2。對F2中純合野生鼠WT、純合突變鼠HO、雜合鼠HE三種小鼠胸腺淋巴細胞中組成IKK激酶的三種亞基進行提純和電泳,結果如圖2。據(jù)此結果推測SCID患者免疫缺陷產(chǎn)生的機制是 IKKβ基因突變導致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,不利于免疫細胞的分化IKKβ基因突變導致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,不利于免疫細胞的分化。
【答案】引物A、引物C;引物B、大引物b;引物之間能結合,會干擾引物和模板鏈的結合,影響PCR過程;增加大分子模板DNA徹底變性的概率;適當提高退火溫度;防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接;IKKβ基因突變導致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,不利于免疫細胞的分化
【解答】
【點評】
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