鏨字石村因甜柿出名而獲“中國甜柿之鄉(xiāng)”。甜柿鮮果肉中含有可溶性糖、微量元素、維生素和β-胡蘿卜素等多種成分，營養(yǎng)價值高，深受消費者的喜愛。甜柿的自然脫澀與乙醛代謝關(guān)鍵酶基因（PDC）密切相關(guān)，推測澀味程度可能與PDC基因的表達情況有關(guān)。已知啟動子區(qū)域存在著許多調(diào)控蛋白的結(jié)合位點，RNA聚合酶和調(diào)控蛋白共同影響基因的表達水平。AD基因表達出的AD蛋白與啟動子足夠靠近時，能夠激活后續(xù)基因轉(zhuǎn)錄，據(jù)此可利用與AD蛋白形成的融合蛋白來篩選待測蛋白。為篩選PDC基因的調(diào)控蛋白，科研人員進行了下列實驗。回答下列問題。
（1）PDC基因的啟動子序列未知，為獲得大量該基因啟動子所在片段，可利用限制酶將基因組DNA進行酶切，然后在 DNA連接酶DNA連接酶的作用下將已知序列信息的接頭片段連接在PDC基因的上游，根據(jù)接頭片段和PDC基因編碼序列設計引物進行PCR，引物的作用是 與模板鏈結(jié)合，提供DNA延伸起始位點與模板鏈結(jié)合，提供DNA延伸起始位點，目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是 大腸桿菌DNA聚合酶不耐高溫，在高溫下會失活大腸桿菌DNA聚合酶不耐高溫，在高溫下會失活。
（2）利用質(zhì)粒A構(gòu)建含有PDC基因啟動子片段的重組質(zhì)粒并導入代謝缺陷型酵母菌，用不含 尿嘧啶尿嘧啶的培養(yǎng)基可篩選出成功轉(zhuǎn)化的酵母菌Y1H；將從甜柿中提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的各種cDNA與質(zhì)粒G連接后導入酵母菌，此時應選擇質(zhì)粒G中的位點 22（填序號1～5）作為cDNA的插入位點，最終獲得攜帶不同cDNA片段的酵母菌群Y187。重組酵母Y1H與Y187能夠進行接合生殖，形成的接合子含有兩種酵母菌質(zhì)粒上的所有基因。若接合子能在含有金擔子素的培養(yǎng)基中生存，則推測待測蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，請結(jié)合圖丙簡述作出該推測的理由 接合子中待測蛋白與AD蛋白形成了融合蛋白，若待測蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，就能與PDC基因啟動子結(jié)合，AD蛋白也能靠近PDC基因啟動子并激活金擔子素基因的表達，使酵母菌表現(xiàn)出金擔子素抗性接合子中待測蛋白與AD蛋白形成了融合蛋白，若待測蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，就能與PDC基因啟動子結(jié)合，AD蛋白也能靠近PDC基因啟動子并激活金擔子素基因的表達，使酵母菌表現(xiàn)出金擔子素抗性。
（3）篩選出PDC基因的調(diào)控蛋白后，為滿足生產(chǎn)上的需要對其進行改良，這種技術(shù)屬于 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程，該工程的起點是 預期蛋白質(zhì)的功能預期蛋白質(zhì)的功能。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】DNA連接酶；與模板鏈結(jié)合，提供DNA延伸起始位點；大腸桿菌DNA聚合酶不耐高溫，在高溫下會失活；尿嘧啶；2；接合子中待測蛋白與AD蛋白形成了融合蛋白，若待測蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，就能與PDC基因啟動子結(jié)合，AD蛋白也能靠近PDC基因啟動子并激活金擔子素基因的表達，使酵母菌表現(xiàn)出金擔子素抗性；蛋白質(zhì)；預期蛋白質(zhì)的功能
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：31引用：1難度：0.7
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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