植物被野生型農(nóng)桿菌感染后會(huì)產(chǎn)生瘤狀結(jié)構(gòu)，主要原因是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒中含有生長素合成基因（A）、細(xì)胞分裂素合成基因（B）。黃萎病是危害棉花種植的常見疾病，科學(xué)家通過基因工程技術(shù)將抗黃萎病基因?qū)朊藁ǎ@得抗黃萎病棉花。如圖為農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA區(qū)段結(jié)構(gòu)示意圖。據(jù)圖回答問題：
（1）構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，需要用兩種不同的限制酶切割目的基因和Ti質(zhì)粒，目的是

防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化，防止反向連接

防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化，防止反向連接

。通過農(nóng)桿菌的侵染將重組DNA分子轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞中，影響轉(zhuǎn)化效率的因素除了溫度、培養(yǎng)時(shí)間等環(huán)境因素外還有

農(nóng)桿菌的種類、農(nóng)桿菌的數(shù)量、棉花細(xì)胞的生理狀態(tài)、棉花細(xì)胞的對(duì)農(nóng)桿菌的敏感性等

農(nóng)桿菌的種類、農(nóng)桿菌的數(shù)量、棉花細(xì)胞的生理狀態(tài)、棉花細(xì)胞的對(duì)農(nóng)桿菌的敏感性等

。（答出2點(diǎn)即可）
（2）為防止農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后使植物產(chǎn)生瘤狀結(jié)構(gòu)，必須把T-DNA片段上的基因

A、B

A、B

（用字母表示）敲除或替換掉。
（3）成功得到導(dǎo)入目的基因的棉花后可用植物組織培養(yǎng)快速繁殖，植物組織培養(yǎng)的方式之一是胚性細(xì)胞經(jīng)過卵裂、分化、

器官發(fā)生

器官發(fā)生

和形態(tài)建成而發(fā)育成胚。從分子水平上檢測目的基因轉(zhuǎn)錄是否成功的方法是

核酸分子雜交技術(shù)檢測是否轉(zhuǎn)錄出特定RNA

核酸分子雜交技術(shù)檢測是否轉(zhuǎn)錄出特定RNA

。
（4）棉花植株在多次繼代培養(yǎng)后可能會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力，可能是由于細(xì)胞或組織中的

激素平衡

激素平衡

被打破，或細(xì)胞對(duì)

外源生長物質(zhì)

外源生長物質(zhì)

的敏感性發(fā)生改變。