RT-PCR技術是將病毒的反轉錄（RT）與PCR相結合，在生物體外進行的核酸合成技術，其流程如圖所示。我國科研人員利用RT-PCR技術獲得了新冠病毒的關鍵基因，導入到工程細胞成功表達出S蛋白，這正是我國新冠病毒疫苗的研發(fā)路徑之一。請回答下列有關問題：

（1）圖中核酸酶H的作用是

使RNA單鏈與逆轉錄形成的DNA單鏈分離

使RNA單鏈與逆轉錄形成的DNA單鏈分離

。
（2）PCR反應的基本步驟是③

變性

變性

、④

復性

復性

、⑤延伸，這主要借助對

溫度

溫度

的控制，使得反應有序進行。其中④溫度的設定是成敗的關鍵，該溫度的設定與引物的長度、堿基組成有關，長度相同但堿基對

G-C

G-C

含量高的引物需要設定更高的溫度。
（3）進行RT-PCR過程中，引物a和b的堿基序列

不相同不互補

不相同不互補

（填“相同”“互補”或“不相同不互補”），若欲對雙鏈cDNA進行n次循環(huán)的擴增，理論上至少需要引物a和b共

2×2^n-1

2×2^n-1

個。
（4）RT-PCR的產(chǎn)物經(jīng)過BamHⅠ、EcoRⅠ雙酶切后，可與同樣經(jīng)過雙酶切得到的PBV載體連接，該操作稱為

基因表達載體的構建

基因表達載體的構建

，也是基因工程的核心步驟。與單一酶切相比，雙酶切具有的優(yōu)點是

防止目的基因（載體）自身連接，防止目的基因與運載體反向連接

防止目的基因（載體）自身連接，防止目的基因與運載體反向連接

。