蘇云金芽孢桿菌存在一種抗蟲基因（Bt毒蛋白基因），科學(xué)家培育出了轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因抗蟲棉。已知Bt基因的兩端存在EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位點，如圖甲所示，質(zhì)粒表達載體如圖乙所示，amp^R為青霉素抗性基因，tet^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，箭頭表示酶切位點。請回答下列問題：

（1）與棉細胞相比，蘇云金芽孢桿菌在結(jié)構(gòu)上的顯著特點是

沒有以核膜為界限的細胞核

沒有以核膜為界限的細胞核

。Bt基因片段和質(zhì)粒表達載體分別含有

2、0

2、0

個游離的磷酸基團。
（2）如果只用EcoRⅠ酶分別在甲、乙圖示位點切割，加入DNA連接酶后，

能

能

（填“能”或“不能”）得到重組質(zhì)粒。如果采用EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶進行切割，與單酶切相比，其優(yōu)點在于

可以防止目的基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接（或使目的基因與質(zhì)粒表達載體結(jié)合的機會增加）

可以防止目的基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接（或使目的基因與質(zhì)粒表達載體結(jié)合的機會增加）

。
（3）用合適的方法進行酶切后將酶切產(chǎn)物進行連接，再將連接產(chǎn)物分別導(dǎo)入去質(zhì)粒受體菌中并繁殖成若干單菌落。從某個單菌落（標記為M）中取出一部分用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基（標記為m₁）培養(yǎng)，一部分用含有青霉素的培養(yǎng)基（標記為m₂）培養(yǎng)。一段時間后，如果

在m₁中的受體菌存活（有菌落），在m₂中的受體菌死亡（無菌落）

在m₁中的受體菌存活（有菌落），在m₂中的受體菌死亡（無菌落）

，即可從該單菌落M中分離得到重組質(zhì)粒。
（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入普通棉細胞中，利用

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

（技術(shù)）可得到轉(zhuǎn)基因植株。能說明轉(zhuǎn)基因抗蟲棉培育成功的簡便方法是

讓蟲吃該植株的葉片，如果蟲死亡，則說明抗蟲棉培育成功

讓蟲吃該植株的葉片，如果蟲死亡，則說明抗蟲棉培育成功

。