人體肝臟細(xì)胞中的乙醛脫氫酶2(ALDH2)是人體酒精代謝中的關(guān)鍵酶,研究人員欲通過相應(yīng)技術(shù)改造ALDH2,使其具有較好的溶解性。回答下列問題:
(1)研究人員可采用定點(diǎn)誘變PCR技術(shù)對 乙醛脫氫酶2(ALDH2)基因乙醛脫氫酶2(ALDH2)基因進(jìn)行改造,這屬于 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程的操作環(huán)節(jié),該工程的基本途徑是 從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)。
(2)利用一定的方法在ALDH2基因中部引入定點(diǎn)突變(G/C堿基對變?yōu)锳/T),若N鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈,則定點(diǎn)突變后的ALDH2基因轉(zhuǎn)錄合成的mRNA中該位點(diǎn)對應(yīng)的堿基為 AA。
(3)得到突變成功的ALDH2基因后,用乙圖所示質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體,需在甲圖ALDH2基因的左側(cè)添加 BglⅡBglⅡ酶切序列,右側(cè)添加 HindⅢHindⅢ酶切序列。構(gòu)建完成后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中,使用含 潮霉素潮霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
【答案】乙醛脫氫酶2(ALDH2)基因;蛋白質(zhì);從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因);A;BglⅡ;HindⅢ;潮霉素
【解答】
【點(diǎn)評】
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(1)PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于
(2)PCR過程所依據(jù)的原理是
(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為
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