為使水稻獲得抗除草劑性狀，科研人員將除草劑草甘膦抗性基因轉(zhuǎn)入水稻植株，獲得抗草甘膦轉(zhuǎn)基因水稻。

（1）將草甘膦抗性基因作為

目的基因

目的基因

，與Ti質(zhì)粒用相同的

限制性核酸內(nèi)切酶

限制性核酸內(nèi)切酶

和DNA連接酶處理構(gòu)建基因表達(dá)載體。
（2）用

CaCl₂

CaCl₂

處理農(nóng)桿菌后獲得感受態(tài)細(xì)胞，將其與基因表達(dá)載體混合完成轉(zhuǎn)化后，在添加

潮霉素

潮霉素

的培養(yǎng)基中，經(jīng)篩選1得到含基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌。
（3）利用PCR技術(shù)，可以鑒定被侵染的愈傷組織中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：
5'---ATGGCT………AGGAAC---3'
3'---TACCGA………TCCTTG---5'
根據(jù)上述序列應(yīng)選擇引物

BD

BD

（填字母）進(jìn)行PCR。
A．引物：5'-TACCGA-3'
B．引物：5'-GTTCCT-3'
C．引物：5'-AUGGCU-3'
D．引物：5'-ATGGCT-3'
（4）PCR擴(kuò)增時(shí)需要根據(jù)草甘膦抗性基因序列設(shè)計(jì)

2

2

種引物，其原因是

防止基因的兩條反向平行的鏈都做模板，其堿基序列不同

防止基因的兩條反向平行的鏈都做模板，其堿基序列不同

。
（5）除了鑒定愈傷組織中是否含有目的基因以外，還可以利用GUS基因表達(dá)產(chǎn)物的鑒定進(jìn)行圖中的篩選2，以確定目的基因是否

表達(dá)

表達(dá)

。兩次篩選后得到的轉(zhuǎn)基因愈傷組織經(jīng)過細(xì)胞的

再分化

再分化

過程，獲得轉(zhuǎn)基因水稻。