長(zhǎng)期高血糖可引發(fā)血管細(xì)胞衰老??蒲腥藛T為研究S蛋白在因高血糖引發(fā)的血管細(xì)胞衰老中的作用,以腺病毒為載體將編碼S蛋白的S基因?qū)胙芗?xì)胞,實(shí)現(xiàn)S蛋白在血管細(xì)胞中的大量表達(dá)。
(1)腺病毒的遺傳物質(zhì)為DNA,其復(fù)制需要E1、E2、E3基因共同完成。為將S基因?qū)胂俨《?,科研人員首先構(gòu)建了含S基因的重組質(zhì)粒,過程如圖1所示。
①科研人員將S基因用 BamHIBamHI和 EcoRIEcoRI酶切后,用DNA連接酶連入質(zhì)粒Ⅰ,得到重組質(zhì)粒Ⅰ(圖1甲所示),導(dǎo)入用CaCl2處理制備的細(xì)菌。用添加抗生素的培養(yǎng)基篩選,對(duì)所長(zhǎng)出的單菌落提取質(zhì)粒,通過 設(shè)計(jì)S基因特異的引物進(jìn)行PCR設(shè)計(jì)S基因特異的引物進(jìn)行PCR的方法可鑒定重組質(zhì)粒Ⅰ是否插入了S基因。
②用PmeⅠ酶切重組質(zhì)粒Ⅰ獲得DNA片段。將此DNA片段與質(zhì)粒Ⅱ(圖1乙所示)共同轉(zhuǎn)化BJ細(xì)菌。在BJ細(xì)菌體內(nèi)某些酶的作用下,含同源序列的DNA片段(圖1甲、乙所示的左臂、右臂)可以發(fā)生同源重組,產(chǎn)生重組質(zhì)粒Ⅱ(圖1丙所示)。使用添加 卡那霉素卡那霉素的培養(yǎng)基可篩選得到 成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒Ⅰ、Ⅱ成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒Ⅰ、Ⅱ的菌落。
(2)將含S基因的重組質(zhì)粒Ⅱ,用 PacIPacI酶切后,獲得改造后的腺病毒DNA。將其導(dǎo)入A細(xì)胞(A細(xì)胞含有E3基因,可表達(dá)E3蛋白),如圖2所示。腺病毒DNA在A細(xì)胞內(nèi)能夠 復(fù)制并指導(dǎo)腺病毒外殼蛋白的合成復(fù)制并指導(dǎo)腺病毒外殼蛋白的合成,從而產(chǎn)生大量重組腺病毒,腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上。
(3)綜合上述信息,從生物安全性角度分析重組腺病毒載體的優(yōu)點(diǎn):重組腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上;腺病毒是人工改造的載體,不含致病基因;重組腺病毒只能在A細(xì)胞中才能夠復(fù)制,即使侵染其他細(xì)胞,也不能復(fù)制重組腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上;腺病毒是人工改造的載體,不含致病基因;重組腺病毒只能在A細(xì)胞中才能夠復(fù)制,即使侵染其他細(xì)胞,也不能復(fù)制。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】BamHI;EcoRI;設(shè)計(jì)S基因特異的引物進(jìn)行PCR;卡那霉素;成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒Ⅰ、Ⅱ;PacI;復(fù)制并指導(dǎo)腺病毒外殼蛋白的合成;重組腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上;腺病毒是人工改造的載體,不含致病基因;重組腺病毒只能在A細(xì)胞中才能夠復(fù)制,即使侵染其他細(xì)胞,也不能復(fù)制
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:8引用:2難度:0.5
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