CRISPR/Cas9系統(tǒng)是一種廣泛存在于原核生物基因中，是細(xì)菌和古細(xì)菌為應(yīng)對(duì)病毒和質(zhì)粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機(jī)制。CRISPR/Cas9技術(shù)為一種基因治療法，這種方法能夠通過DNA剪切技術(shù)治療多種疾病。該技術(shù)的實(shí)質(zhì)是用特殊的引導(dǎo)序列（sgRNA）將Cas9酶“基因剪刀”精準(zhǔn)定位到所需切割的基因上，然后進(jìn)行編輯。科研人員設(shè)想利用新一代基因編輯技術(shù)可拯救失明小鼠。回答下列問題：
（1）Cas9酶“基因剪刀”，又稱

限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）

限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）

，動(dòng)植物細(xì)胞中沒有編碼Cas9酶的基因，可通過構(gòu)建

基因表達(dá)載體

基因表達(dá)載體

，用

顯微注射

顯微注射

技術(shù)將其導(dǎo)入受體細(xì)胞最終表達(dá)出Cas9酶。
（2）小鼠失明的原因是其T細(xì)胞受損，免疫系統(tǒng)功能低下，利用 CRISPR-Cas9技術(shù)進(jìn)行基因編輯，選擇性地敲除細(xì)胞基因中一種編碼PD-1蛋白的基因，從而將T細(xì)胞潛在的對(duì)腫瘤細(xì)胞的攻擊能力“激活”。在體外進(jìn)行T細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增后，再輸回患者體內(nèi)，用T細(xì)胞去攻擊腫瘤細(xì)胞達(dá)到預(yù)期的治療目的。為有效阻止新分化生成的T細(xì)胞受損，科研人員將sgRNA序列導(dǎo)入骨髓

造血干

造血干

細(xì)胞中，以構(gòu)建 sgRNA-Cas9酶復(fù)合體。Cas酶可以催化

磷酸二酯

磷酸二酯

鍵斷裂，以實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA序列的定向切割。設(shè)計(jì)sgRNA序列需要弄清目的基因的核苷酸序列，原因是

SgRNA序列需要與目的基因上部分堿基互補(bǔ)配對(duì)，從而精準(zhǔn)定位到目的基因進(jìn)行編輯

SgRNA序列需要與目的基因上部分堿基互補(bǔ)配對(duì)，從而精準(zhǔn)定位到目的基因進(jìn)行編輯

。
（3）為檢測T細(xì)胞的受體基因（目的基因）是否成功被編輯，采用

DNA分子雜交

DNA分子雜交

技術(shù)檢測是否含有目的基因，還需要對(duì)

目的基因的表達(dá)

目的基因的表達(dá)

進(jìn)行檢測。