去年年初，國內(nèi)牛奶制品因?yàn)槟敛葸M(jìn)口成本上漲而漲價(jià)的現(xiàn)象引起了人們的關(guān)注。紫花苜蓿是一種重要的牧草，某研究團(tuán)隊(duì)擬將耐鹽基因HLAl導(dǎo)入紫花苜蓿中培育耐鹽牧草，具體實(shí)驗(yàn)流程如圖甲，圖乙是載體pCHLAl中T-DNA示意圖?；卮鹣铝袉栴}：

（1）過程②為

基因表達(dá)載體

基因表達(dá)載體

的構(gòu)建，是基因工程的核心，此過程需要使用的酶是

限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶）和DNA連接酶

限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶）和DNA連接酶

。
（2）過程③常用的轉(zhuǎn)化方法是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

，轉(zhuǎn)化是指

目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程

目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程

。
（3）已知Basta是一種除草劑，則為達(dá)到培養(yǎng)并篩選的目的，過程④的培養(yǎng)基所含的成分必須有無機(jī)營養(yǎng)、有機(jī)營養(yǎng)、

植物激素、Basta（必須同時(shí)回答到這兩種成分）

植物激素、Basta（必須同時(shí)回答到這兩種成分）

。
（4）過程④得到的幼苗

不一定

不一定

（填“一定”或“一定不”或“不一定”）含有HLAl基因，為進(jìn)一步確認(rèn)，可用PCR擴(kuò)增的方法進(jìn)行鑒定，則進(jìn)行PCR反應(yīng)的引物應(yīng)根據(jù)

HLA1基因序列

HLA1基因序列

設(shè)計(jì)，PCR的原理是

DNA雙鏈復(fù)制

DNA雙鏈復(fù)制

。
（5）要檢測目的基因是否插入到苜蓿細(xì)胞的染色體DNA上，可采用

DNA分子雜交

DNA分子雜交

技術(shù)。
（6）判斷本實(shí)驗(yàn)的目的是否表達(dá)成功，還應(yīng)進(jìn)行

耐鹽檢測（或鑒定）

耐鹽檢測（或鑒定）

實(shí)驗(yàn)。