人促紅細(xì)胞生成素（EPO）是一種可用于治療腎性貧血的糖蛋白類激素，可用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)EPO。科研人員利用大鼠乳清酸蛋白（WAP）基因上游的調(diào)控序列及啟動(dòng)子和3′UTR序列構(gòu)建了基因表達(dá)載體。構(gòu)建前，科研人員擴(kuò)增了WAP基因上游不同長(zhǎng)度的片段，將這些片段分別插入EPO基因中，以確定WAP基因啟動(dòng)子的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。

（1）為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入到基因表達(dá)載體中，以指導(dǎo)EPO基因的表達(dá)，需要在引物末端添加特定的限制酶識(shí)別序列。由圖中信息可知，在P1～P4末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是

ClaⅠ

ClaⅠ

，在A末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是

MunI

MunI

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（2）將通過PCR處理后的含不同長(zhǎng)度的WAP基因上游序列與EPO基因連接，構(gòu)建成表達(dá)載體的過程中，需要

4

4

種限制酶切割上述DNA片段。檢測(cè)轉(zhuǎn)基因雌性大鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)入含P1～P3與A擴(kuò)增產(chǎn)物的個(gè)體乳汁中有EPO，而含P4與A擴(kuò)增產(chǎn)物的個(gè)體沒有EPO生成。含P4與A擴(kuò)增產(chǎn)物的個(gè)體沒有EPO生成的原因是

P4與A擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的WAP基因的啟動(dòng)子，EPO基因不表達(dá)

P4與A擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的WAP基因的啟動(dòng)子，EPO基因不表達(dá)

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（3）該實(shí)驗(yàn)中，在EPO基因上游插入大鼠WAP基因啟動(dòng)子的理由是

能使EPO基因在大鼠的乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)

能使EPO基因在大鼠的乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)

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（4）科研人員不選用大腸桿菌作為該實(shí)驗(yàn)的受體細(xì)胞，從基因表達(dá)的角度分析，其原因是

EPO基因是真核生物的基因，該基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA無法在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)加工成熟，表達(dá)出來的產(chǎn)物不是EPO

EPO基因是真核生物的基因，該基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA無法在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)加工成熟，表達(dá)出來的產(chǎn)物不是EPO

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