白細(xì)胞介素35（IL-35）是由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子。IL-35是由p35、EBI3兩個(gè)亞基組成的二聚體。為研究IL-35的作用機(jī)制，科研人員利用pSec質(zhì)粒構(gòu)建了IL-35的重組表達(dá)載體，利用DNA重組技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在體外獲取p35、EBI3的融合蛋白。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
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（1）從人的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞中提取

（總）RNA

（總）RNA

，合成cDNA，進(jìn)而在PCR反應(yīng)體系中加入不同的

引物對(duì)

引物對(duì)

及其他必要組分，分別擴(kuò)增出p35、EBI3兩種基因。利用

（瓊脂糖凝膠）電泳

（瓊脂糖凝膠）電泳

技術(shù)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的基因相比，擴(kuò)增出的兩種基因缺少

啟動(dòng)子、終止子和內(nèi)含子

啟動(dòng)子、終止子和內(nèi)含子

（結(jié)構(gòu)）。
（2）基因p35、EBI3及pSec質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)如圖所示。據(jù)圖可知，若要將EBI3、p35兩個(gè)基因先后連入載體，則應(yīng)先選用限制

XhoI、NotI

XhoI、NotI

將基因EBI3連入，后選用限制酶

HindIII、AclI

HindIII、AclI

將基因p35連入。
（3）通常利用

顯微注射

顯微注射

法將重組表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞。但該方法操作復(fù)雜，難以批量轉(zhuǎn)化動(dòng)物細(xì)胞，故可利用細(xì)胞膜具有

流動(dòng)性

流動(dòng)性

的特點(diǎn)，將重組質(zhì)粒包裹于脂質(zhì)體中，使脂質(zhì)體與細(xì)胞膜融合；或?qū)⑤d體吸附在無(wú)機(jī)鹽沉淀上，當(dāng)沉淀靠近細(xì)胞表面時(shí)，可被細(xì)胞通過(guò)

胞吞

胞吞

作用攝入細(xì)胞內(nèi)。
（4）完成目的基因轉(zhuǎn)化后，為鑒定受體細(xì)胞中是否存在目的基因，既可利用PCR技術(shù)，還可設(shè)計(jì)DNA探針檢測(cè)。與設(shè)計(jì)引物相比，設(shè)計(jì)探針的主要不同點(diǎn)是

根據(jù)目的基因內(nèi)部特異性序列設(shè)計(jì)探針，而引物需要根據(jù)目的基因兩端的序列設(shè)計(jì)

根據(jù)目的基因內(nèi)部特異性序列設(shè)計(jì)探針，而引物需要根據(jù)目的基因兩端的序列設(shè)計(jì)

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