黏膜免疫系統(tǒng)作為第一道免疫防御屏障，能夠參與保護(hù)生物體免受病原體的感染。多聚免疫球蛋白受體（pIgR）作為黏膜免疫防御的一個(gè)關(guān)鍵因子，能夠介導(dǎo)免疫球蛋白跨過上皮細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌，發(fā)揮免疫球蛋白在黏液中清除病原體和毒素的作用。研究人員從大菱鲆提取pIgR基因，針對(duì)不同器官組織開展了pIgR基因研究（如圖），其中DEPC物質(zhì)可與RNA酶結(jié)合使酶發(fā)生變性。

（1）研究人員通過mRNA得到cDNA時(shí)所需要的酶是

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

，提取過程加入DEPC物質(zhì)作用是

防止RNA被降解

防止RNA被降解

。
（2）為將pIgR基因以正確方向插入質(zhì)粒需要雙酶切，這就要求在設(shè)計(jì)引物時(shí)，需在引物的5'端加入相應(yīng)的酶切位點(diǎn)。已知a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，引物1的5'端酶切位點(diǎn)的堿基序列為GAATTC，則引物2的5'端酶切位點(diǎn)的堿基序列為

GCGGCCGC

GCGGCCGC

，理由是

a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動(dòng)子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點(diǎn)

a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動(dòng)子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點(diǎn)

。
（3）構(gòu)建pIgR基因表達(dá)載體后，與處于感受態(tài)的大腸桿菌菌株混合，pIgR基因表達(dá)載體進(jìn)入菌體內(nèi)，此過程稱為

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

。然后將菌液涂布在含有

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的LB固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，加入誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)pIgR基因在大腸桿菌中表達(dá)，提取、純化蛋白質(zhì)。
（4）在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中多次使用PCR技術(shù)，如利用PCR技術(shù)擴(kuò)增pIgR基因時(shí)，需要在反應(yīng)體系中加入

模板

模板

、

4種脫氧核苷三磷酸

4種脫氧核苷三磷酸

、引物、耐高溫的DNA聚合酶、緩沖液等物質(zhì)，設(shè)置PCR儀器的控制參數(shù)，啟動(dòng)三步驟擴(kuò)增過程，在三個(gè)步驟中溫度最低是

復(fù)性

復(fù)性

。