血凝素基因（HA）編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒囊膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個亞單位，其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點。IgGFc基因片段（長度為717bp）編碼人IgG抗體中的一段小肽，常作為融合蛋白標簽。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號肽的引導，本研究中用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽，科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達載體，并導入大腸桿菌表達和分泌，請回答：
（1）流感病毒囊膜主要由 磷脂和蛋白質(zhì)磷脂和蛋白質(zhì)組成，囊膜上血凝素的合成場所在 宿主細胞的核糖體宿主細胞的核糖體。
（2）本實驗用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽有利于 融合蛋白分泌到大腸桿菌細胞外融合蛋白分泌到大腸桿菌細胞外，PCR擴增目的基因時應該選擇圖中引物 b和引物cb和引物c設(shè)計引物時，不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列，原因是 防止產(chǎn)生的HA上不含IgGFc標簽防止產(chǎn)生的HA上不含IgGFc標簽。
（3）應選擇限制酶 EcoRVEcoRV來切割質(zhì)粒A，然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合，同時加入 T4DNA連接T4DNA連接酶，使得目的基因與質(zhì)粒A相連。
（4）若目的基因與質(zhì)粒A正向連接，HA1基因轉(zhuǎn)錄時的模板鏈是由圖中的引物 cc（填“a”、“b”、“c”或“d”）在PCR時延伸而成；若目的基因與質(zhì)粒A反向連接，用BamHⅠ和SacⅠ同時切割重組質(zhì)粒，完全酶切后的產(chǎn)物進行凝膠電泳，其中最靠近加樣孔的條帶長度約為 51815181bp。
（5）融合蛋白中的標簽蛋白有利于目的蛋白的分離和純化，基因工程生產(chǎn)HA1作為疫苗時，選擇人IgGFc作為標簽的優(yōu)點還有 降低免疫排斥反應降低免疫排斥反應。
【答案】磷脂和蛋白質(zhì)；宿主細胞的核糖體；融合蛋白分泌到大腸桿菌細胞外；b和引物c；防止產(chǎn)生的HA上不含IgGFc標簽；EcoRV；T4DNA連接；c；5181；降低免疫排斥反應
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：27引用：1難度：0.6
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